聚乙二醇 (PEG) 浓缩法及超过滤法纯化病毒实验1
聚乙二醇 (PEG) 浓缩法
| 实验方法原理 | 这一方法是浓缩大量病毒悬液和初步纯化病毒的常用方法之一。 PEG 是环氧乙烷和水缩合而成的水溶性非离子型聚合物，相对分子质量为 2 000-6 000 的 PEG 多用于浓缩病毒，其中以 PEG6 000 效果最好。 PEG 浓缩法能成百倍的浓缩病毒，而且对病毒的结构和抗原性有保护作用。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 操作方法有以下三种。 1. 直接加入法 当只有少量的病毒悬液时采用此法。在病毒悬液中加入 8%~10% 的PEG搅匀使病毒沉淀。此法须以密度梯度离心法去除病毒沉淀物中的 PEG 。 2. 液体浓缩法 ①用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放病毒，3 000 r/min 离心 30 min,除去细胞碎片；②缓慢搅动并加入 NaCl , 使最终浓度为 0. 5mol/L NaCl , 再加人等量的 PEG,4℃过夜；③8 000r/min 离心 30 min, 收集病毒沉淀；在病毒沉淀中加入适量的PBS 缓冲液， 4℃过夜； 10 000r/min 离心 1 h。③必要时可用梯度离心或其他方法进一步纯化。分离大量病毒宜用此法。 3. 固体浓缩法 将欲浓缩的病毒悬液约 100 ml 置于透析袋内，必须扎紧透析袋口，放入适量的 PEG 固体，置 4℃约 24 h 即可将病毒悬液浓缩至 10 ml 左右。此法透析袋内的盐分随液体一起透析出，浓缩后悬液的盐分不升高。 展开 |
推荐
