聚乙二醇沉淀法浓缩蛋白质实验
聚乙二醇法
| 实验方法原理 |
聚乙二醇（PEG）是一个非离子水溶性多聚体，使用 PEG 沉淀蛋甶质时，只在个别浓度下才使蛋白质稍有变性。由于 PEG 溶解时散热低，形成沉淀的子衡时间短等特点，使它在蛋白质的组分分离以及结晶中成为一个有用的试剂。通常 PEG 终浓度达 30％ 时，蛋白质就能够达到最大量沉淀。 |
|---|---|
| 实验材料 | 蛋白质溶液 |
| 试剂、试剂盒 | 聚乙二醇 6000 |
| 仪器、耗材 | 烧杯 磁力搅拌器和搅拌子 离心机和转头 |
| 实验步骤 |
1. 向 100 ml 蛋白质溶液中，在缓慢搅拌下加入 150 ml 50％ PEG 6000（w／v 溶于蒸馏水）； 2. 继续搅拌 30～60 min，至完全沉淀为止； 3. 10 000×g 离心 10 min； 4. 除去上清； 5. 用 1～2 倍沉淀体积的缓冲液再悬浮沉淀。
展开 |
| 注意事项 |
1. 在等电点附近蛋白质溶解度降低。 2. 用硫酸铵沉淀法能够除去 PEG。也可采用离子交换层析，也有报道指出高浓度 PEG 使凝胶过滤柱层析行为异常。 |
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