1. 底层琼脂平皿的制备
将1.4 %琼脂加热融化后倾注于平皿内,每个平皿6 ml,凝固后置湿盒37 ℃备用。 2. 0.7 %琼脂加热融化后加入华氏管内,每管2 ml,47~49 ℃水浴保温备用。
3. 免疫小鼠脾细胞悬液制备
用4×103个绵羊红细胞(SRBC)盐水悬液腹腔免疫小鼠,对照为等量生理盐水。4 天后,小鼠拉脱颈椎处死,取出脾脏,用RPMI164。洗一次后置平皿中不锈钢筛网上,用注射器针芯研磨成悬液,洗涤两次,调整细胞数为3~8×106 /ml。台盼兰染色查活细胞数应大于 90%。置4 ℃冰箱备用。 4. 试验平皿的制备
依次将预温40 ℃左右的25 %SRBC、牼-SRBC吸收的灭活胎牛血清以及保存于4 ℃的脾细胞悬液各0.1 ml加入预热47~49 ℃的含0.7 %琼脂的华氏管中,迅速混匀,立即倾注于铺有底层琼脂的平皿内,凝固后,置37 ℃孵育1 小时。 5. 加入1∶5~1∶10稀释的新鲜豚鼠血清0.5~1.0 ml,使其均匀覆盖表面,再次置37 ℃温育30 分钟,即可用肉眼或借助于放大镜进行空斑计数。 展开 |