放射免疫测定技术的种类
按其方法学原理,主要有两种基本类型。
1、放射免疫分析(RIA)
RIA 是该类技术最经典的模式。它是以放射核素标记抗原与反应系统中未标记的抗原竞争特异性抗体的基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。使放射性标记抗原和未标记抗原(待测物)与不足量的特异性抗体竞争性地结合,反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。由于 RIA 是以放射性标记与非标记抗原竞争性地与抗体结合为理论基础,故又称为竞争性放射饱和分析法。其中又分为单层竞争法与双层竞争法。
(1)单层竞争法:预先将抗体连接到载体上,加入标记抗原(*Ag)和待检抗原(Ag)时,二者竞争性地与固相载体结合。若固相载体和标记抗原的量不变,则加入待检抗原的量越多,B/F 值越小,根据这种函数关系,绘制标准曲线。
(2)双层竞争法:将抗原与载体结合,然后加入抗体与抗原结合,载体上的放射量与待测浓度成反比。此方法繁杂,且有时重复性差。
2、免疫放射分析(IRMA)
用放射性核素标记的过量抗体非竞争结合抗原,经固相分离,测定待测样品中抗原量的一种方案。
免疫放射分析是从放射免疫分析的基础上发展起来的核素标记免疫测定,其特点为用核素标记的抗体直接与受检抗原反应并用固相免疫吸附剂作为 B 或 F 的分离手段。IRMA 于1968年由 Miles 和 Heles 改进为双位免疫结合,在免疫检验中取得了广泛应用。IRMA 属固相免疫标记测定,其原理与 ELISA 极为相似,不同点主要为标记物为核素及最后检测的为放射性量。单位点IRMA的反应模式如图1-1所示。
图1-1 单位点IRMA的反应模式示意图
抗原与过量的标记抗体在液相反应后加入免疫吸附剂,即结合在纤维素粉或其他颗粒载体上的抗原。游离的标记抗体与免疫吸附剂结合被离心除去,然后测定上清液的放射性量。双位点 IRMA 的反应模式如图1-2所示。
图1-2 双位点IRMA的反应模式示意图
受检抗原与固相抗体结合后,洗涤,加核素标记的抗体,反应后洗涤除去游离的标记抗体,测量固相上的放射性量。不论是单位点还是双位点 IRMA,最后测得的放射性与受检抗原的量成正比。
