1. 烤片:68℃,20 min。 2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水:二甲苯I 20 min⇒二甲苯II 20 min⇒00%酒精10 min⇒100%酒精10 min⇒95%酒精5 min⇒80%酒精5 min⇒70%酒精5 min。 3. 阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10 min,PBS冲洗3X5 min。 4. 抗原修复:置0.01 M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃,15-20 min),自然冷却20 min以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5 min。 5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗。 6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5 min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);滴加生物素标记二抗,37℃孵育30 min,PBS冲洗3X5 min。 7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30 min,PBS冲洗3X5 min。 8. DAB/H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。 展开 |