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Southern杂交的结果分析

2022.4.19

  在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题:转膜必需充分,要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背景太深,洗膜过度又可能导致假阴性。若用到有毒物质,必需注意环保及安全。

  (1)出现斑点

  解决方法:①加热至合适的温度;离心或过滤除去颗粒。②不要把探针直接加到膜上。③戴无粉末的手套。④用均匀的溶液和底物覆盖膜。

  (2)高背景

  解决方法:①降低探针的浓度。②延长封闭时间。③提高洗膜温度,增加表面活性剂,降低盐浓度。④用高质量的滤纸接触膜。

  (3)无信号

  解决方法:①延长曝光时间。②通过EB染色确定转膜效果。③点试验检测探针活性。④增加探针浓度。⑤增加目标基因浓度。⑥转膜前充分变性。⑦固定之前,将膜浸入1×TE或水中。⑧洗膜时,增加盐浓度,降低表面活性剂浓度或温度。

  (4)非特异带

  解决方法:①降低探针浓度。②降低SSC浓度。③检查温度。④减少目标基因浓度。⑤用1×TE或0.1% SDS充分洗膜。

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