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非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_电穿孔转化法

2019.4.04

实验材料	细胞
试剂、试剂盒	三梨糖醇
仪器、耗材	PM 或 YE 培养基
实验步骤	1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X10⁷ 个细胞。 2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。 3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度为每毫升 1X10⁹ 个细胞。 4. 将 1 ng~1 μg DNA 和 0.2 ml 细胞混匀，立即转移到冰冷的电穿孔杯中。 5. 于 2.25 kV、200 Ω、25 μF 对细胞进行电穿孔，立即加入 0.5 ml 冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇。 6. 在非常干的选择性 PM 平板上涂板。展开

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