关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法

2019.4.05
实验材料

细胞

试剂、试剂盒

PEG3350

仪器、耗材

YPAD 液体培养基涡旋振荡器

实验步骤

1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基,30℃ 振荡培养过夜,使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。

2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞,用 100 ml 灭菌水洗两遍,加 200 μl 灭菌水重悬细胞沉淀。

3. 加 100 μl 细胞悬液到 50 μl 含有 100~150 ng 需转化的 DNA 和 20 μg 单链载体 DNA 的溶液中,充分混匀。

4. 加 200 μl 50% 的 PEG3350,用涡旋振荡器快速混匀。

5. 将混合物置于 42℃ 水浴孵育 15 分钟。

6. 将混合物转移到冰冷的 0.2 cm BioRad 电穿孔杯中,用带有脉冲控制器或其他相应设备的 BioRad 基因脉冲器进行电穿孔,条件:1.5 kV、25 μFD、200 Ω。

7. 立即加入 600 μl 冰冷的 YPAD 培养基或灭菌蒸馏水,转移到一个灭菌的 1.5 ml 微量离心管中,冰浴 5 分钟。

8. 离心 2 秒沉淀细胞,用室温的 YPAD 培养基或灭菌蒸馏水洗一遍,重悬于 1 ml 的 YPAD 或灭菌蒸馏水。

9. 取 2、20、200 μl 涂布 SC 减样选择培养基平板,30℃ 培养 3~4 天。

展开


推荐
关闭