（7）切成的蜡带到20~30 cm 长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。
（8）用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。
（9）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。
9. 展片、贴片
打开水浴锅，使水温维持在40~45℃，另准备30%乙醇溶液。
（1）切片时，将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。
（2）用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在乙醇溶液的水面上，使切片展开。
（3）小镊子轻轻地将连在一起的切片分开，用一个载玻片将切片完整，已展开的切片捞至温水中，使之充分展开。
（4）另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片1/3处，另一端（磨边，粗糙的一端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。
10. 脱蜡复水
（1）将水浴锅温度调至60℃，待水温控制在60℃时。
（2）将切片连同切片架放入一干燥的染色缸内，放入水浴锅中，盖上盖子（可密封），30 min 至蜡熔化。
（3）之后，石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5 min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各3~5 min，再放入蒸馏水中3 min。
11. 染色
（1）切片放入苏木精中染色约10~30 min。
（2）染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。
（3）室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。
12. 水洗
（1）用自来水流水冲洗约15 min。
（2）使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可）。
（3）但要注意流水不能过大，以防切片脱落。
13. 分化
（1）将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色。
（2）约2秒至数十秒钟，见切片变红，颜色较浅即可。
14. 漂洗
切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。
15. 脱水Ⅰ
切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3~5 min。
16. 复染
（1）用0.5%伊红乙醇液对比染色1~3 min。
（2）伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。
（3）反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
17. 脱水Ⅱ
（1）将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色。
（2）然后放入无水乙醇中3~5 min。
（3）最后用吸水纸吸干多余的乙醇。
18. 透明
（1）切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5 min。
（2）二甲苯应尽量保持无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。
（3）切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
19. 封藏：中性树胶封存
因切片经二甲苯透明，使用中性树胶作为封藏剂，树胶可用二甲苯稀释至合适的稠度。
20. 封藏的方法：
（1）封片前应根据材料的大小，选用不同规格的盖玻片。
（2）材料透明后，在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片的一面向上）。
（3）迅速地在切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角，然后再缓慢地将盖玻片放下，这样就可以减少或避免产生气泡。
（4）如胶液不足，可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。
（5）如胶液过多，可在干燥以后用刀刮去，并用纱布蘸二甲苯拭去残留的树胶。
（6）染色结果：细胞核被苏木素染成蓝色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 三、免疫组化染色
1. 石蜡切片，步骤同前。切片经贴片后，60℃烤片30 min使蜡熔化，经二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10 min，脱蜡。然后，将切片放入100%、95%、90%、80%、70%乙醇中3~5 min，再放入蒸馏水中3 min，水化。
2. 脱蜡和水化后，用PBS（pH7.4，具体看所用抗体及染色试剂说明）冲洗3次，每次3分钟。洗瓶冲洗。
3. 根据抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。可选步骤，具体见抗体说明书。
4. 每张切片加1滴或50 μl 3%过氧化氢，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3次，每次3分钟。此步骤是对内源性过氧化物酶含量高的组织而言。
5. 除去PBS液，每张切片加1滴或50 μl 的第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，具体参见每种抗体的说明书。PBS冲洗3次，每次3分钟。
6. 除去PBS液，每张切片加1滴或50 μl 即用型MaxVisionTM试剂或SP试剂，室温下孵育10~15分钟。PBS冲洗3次，每次3分钟。
7. 除去PBS液，每张切片加2滴或100 μl新鲜配制的DAB或AEC溶液，显微镜下观察3~5分钟（DAB）或37℃环境下10~30分钟（AEC）。
8. 自来水冲洗，苏木素复染10分钟，PBS或自来水冲洗返蓝。如果用DAB显色，则切片经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，步骤同H-E染色，中性树胶封固；如果用AEC显色，则切片不能经酒精脱水，而直接用水性封片剂封片。
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