病理制片技术——组织脱水
组织经固定后会有大量水分，组织脱水是用某些溶剂逐渐将组织内的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡的渗入。
一、手工脱水
1．器械准备：大标本缸6个，浸蜡用金属缸3个，脱水篮，恒温烤箱。
2．日常工作程序见表5．1。
| 试剂 | 浓度／温度 | 时间设定 |
| 中性缓冲甲醛 | 4% | 3.00h |
| 乙醇 | 80% | 1.00h |
| 乙醇 | 90% | 1.00h |
| 乙醇 | 95% | 过夜 |
| 无水乙醇I | 2.00h | |
| 无水乙醇Ⅱ | 2.00h | |
| 二甲苯一无水乙醇 | 体积比为1:1 | 30min |
| 二甲苯I | 30min | |
| 二甲苯Ⅱ | 1.00h | |
| 石蜡 | 60℃ | 1.00h |
| 石蜡 | 60℃ | 1.00h |
| 石蜡 | 60℃ | 1.00h |
3．注意事项
(1)所用标本缸要大一些，达到组织块与液体比6～10倍。
(2)固定液、脱水剂要勤更换，可以采用前移更换。
(3)二甲苯时间不宜过长，不要超过2 h。
(4)石蜡温度不得高于60℃。
(5)所有程序应每间隔0．5 h摇动2～3次以利于固定脱水浸蜡彻底。二、半自动脱水机
半自动脱水机日常工作程序可参考全手工脱水日常工作程序进行。梯度乙醇的脱水时间加长。注意事项同手工脱水。
三、全自动密闭式脱水机
全自动密闭式脱水机有控制面板、处理槽、石蜡箱和试剂柜四个部分。为保证组织处理无刺激味道，全自动密闭式脱水机还设有活性炭过滤器。
(1)控制面板有显示屏和小键盘，可由此输入20个不同的处理程序，可设置处理时间和温度，可启动P/V循环(压力和真空交替)和混合循环，出现故障时有报警提示。
(2)处理槽是组织块进行处理的容器。
(3)石蜡箱可将熔化的石蜡保持在设定的温度待用。
(4)试剂柜装有处理试剂。
1．日常工作程序见表5．2。表5．2 全自动密闭式脱水机脱水日常工作程序 溶液 百分浓度 （％） 时间设定 温度 （℃） P/V循环（压力和真空交替） 混合循环 中性缓冲甲醛液 4 2.00h 35 ＋ ＋ 乙醇 80 1.00h － － 乙醇 95 1.00h － － 乙醇 95 1.00h ＋ ＋ 乙醇 95 1.00h ＋ ＋ 乙醇 100 1.00h － － 乙醇 100 1.00h ＋ ＋ 乙醇 100 1.00h ＋ ＋ 二甲苯 100 0.50h － － 二甲苯 100 1.00h ＋ ＋ 石蜡 1.00h 60 － — 石蜡 1.00h 60 ＋ ＋ 石蜡 1.00h 60 ＋ ＋ 石蜡 1.00h 60 ＋ ＋ 注：截止时间为1/8：00 am
2．双休日工作程序：脱水程序及各试剂的所用时间及功能相同，只将截止时间调至3/8:00 am即可。
3．外检小标本工作程序见表5．3。
表5．3全自动密闭式脱水机外检小标本工作程序 试剂 百分浓度（％） 时间设定 温度（℃） P/V循环（压力和真空交替） 混合循环 中性甲醛 4 2.00h 35 ＋ ＋ 乙醇 80 1.00h － － 乙醇 95 1.00h － － 乙醇 95 1.00h － － 乙醇 95 1.00h ＋ ＋ 乙醇 100 30min － － 乙醇 100 30min － － 乙醇 100 30min ＋ ＋ 二甲苯 100 20min － － 二甲苯 100 20min ＋ ＋ 石蜡 30min 60 － — 石蜡 30min 60 － － 石蜡 1.00h 60 ＋ ＋ 石蜡 1.00h 60 ＋ ＋ 注：截止时间为1／8：00am
4．小动物组织工作程序见表5．4。
表5．4全自动密闭式脱水机小动物组织工作程序 溶液 百分浓度（％） 时间设定 温度（℃） P/V循环（压力和真空交替） 混合循环 中性甲醛 4 2.00h 35 ＋ ＋ 乙醇 80 0.50h － － 乙醇 95 0.50h － － 乙醇 95 0.50h ＋ ＋ 乙醇 95 0.50h ＋ ＋ 乙醇 100 0.50h － － 乙醇 100 0.50h － － 乙醇 100 1.00h ＋ ＋ 二甲苯 100 20min － － 二甲苯 100 20min ＋ ＋ 石蜡 0.50h 60 － — 石蜡 0.50h 60 ＋ ＋ 石蜡 1.00h 60 － － 石蜡 1.00h 60 ＋ ＋ 5．大动物组织(如狗、兔、猴)：可以同外检组织使用一个程序。
6．脱水程序运行完毕后处理。
7．全自动密闭式脱水机的注意事项。
(1)固定液每三天更换一次，组织块为600～800块。组织固定的好坏直接影响切片质量。为达到组织固定彻底的目的，可使用脱水机的P／V循环和混合循环功能，也可将温度定在38～40℃。
(2)梯度乙醇脱水剂每星期更换一次，组织块约为1000～1200块。方法是将第二缸的80％乙醇倒弃，以后的95％乙醇和无水乙醇依次前移。只将最后 一缸的无水乙醇更换为新液。这样更换不但节约了乙醇，更重要的是如果脱水剂全部更换为新液就会产生过脱水，组织发脆。经过几次脱水后的乙醇，浓度虽然只降 低了5％～10％，但脱水过程中置换出的细胞外液、组织液等可减弱乙醇的脱水能力。因此实际工作过程中须根据组织块的多少、脱水剂的使用时间合理设定脱水 剂的脱水时间、P／V循环和混合循环功能。
(3)透明剂二甲苯10～15天更换一次。第一缸二甲苯倒弃，第二缸前移至第一缸，第二缸更换为新液。二甲苯起媒介作用，将无水乙醇置换出又使石蜡很好地 浸入组织内。如果透明时间过长、强度过大(如P／V循环和混合循环全程使用)就会产生透明，以致组织发脆发干不利于切片。所以透明剂设定的时间、P／V循 环和混合循环的使用要有机配合。
(4)所用石蜡要干净无杂质，熔点58～60℃。使用一定时间后，倒弃二甲苯含量过高的第一缸石蜡，将后三缸石蜡依次前移，最后一缸换新鲜石蜡。石蜡温度设定为60℃，这样的温度可避免小标本浸蜡因温度过高而发脆。
(5)脱水机要放置干燥通风房间，防止阳光直射显示屏。最好配置一台不间断电源(UPS)，防止瞬间断电影响机器使用。
(6)使用全自动密闭式脱水机要防止过脱水，过透明。
(1)先按泵出按钮将石蜡抽回缸内，再打开处理槽将组织块取出。
(2)将处理槽内及槽盖上的余蜡擦净。
(3)将底部中央过滤器螺丝拧开，将管道口的蜡擦净，拧紧螺丝。
(4)盖上盖后，按清洗按钮清洗。
