原代细胞骨架的染色方法！
原代细胞骨架的染色方法！
一、微丝的显示方法步骤：
1、用PBS液漂洗盖片培养的原代细胞3次，每次30s；
2、用2%的甲醛/PBS液固定原代细胞3min；
3、用0.5%的三硝基甲苯/PBS处理3次，每次10min；
4、PBS漂洗3次；
5、用罗丹明（rhodamine）标记的鬼笔环肽（phalloidin）（1：10）室温中反应15min；
6、PBS漂洗3次；
7、60%甘油+荧光防淬剂封片；
8、荧光显微镜观察；
二、微管的显示方法：
1、用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次，每次30s；
2、在室温中用3%甲醛/PBS固定20min；
3、用PBS液再漂洗3次，每次1min，最后用滤纸吸干多余的PBS液；
4、投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；
5、用PBS漂洗3次，每次1min，最后用滤纸吸干多余的PBS液；
6、向直径6cm的干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，于37℃温箱中放置45min—1h；
7、向碟皿内匀速缓慢滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子夹出，按步骤3处理；
8、向干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗，其后操作按步骤6进行；
9、按步骤7和3操作；
10、滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上，把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上；
11、将盖片置于荧光显微镜下观察；
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