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植物组织和细胞的显微化学染色实验

2020.8.24

实验方法原理 植物体内含有许多种化学物质。在得到植物组织切片之后,可以通过组织化学(显微化学)染色的方法使不同类型的化学成分在显微镜下得以显示,从而了解这些物质在植物的组织细胞内的空间分布用于组织化学研究的切片,根据研究对象和所要检测的化学物质的不同,可采用石蜡切片,有时要求新鲜材料采用徒手切片或冰冻切片。在植物组织切片过程中恰当地运用一些简单的组织化学染色方法,一方面可以确定细胞壁及细胞后含物的化学性质,另一方面也有利于分辨组织和细胞的结构

实验材料 植物组织

实验步骤

(1)纤维素:植物细胞的细胞壁中最主要的成分是纤维素。常用的显色方法为碘-硫酸法:取 1%的碘-碘化钾溶液滴加在材料上,冉加 1 滴 66.5%的硫酸,纤维素细胞壁与碘和硫酸作用而变成蓝色。在细胞中,纤维素的成分愈多和其他后来参加组成细胞壁的成分愈少,则蓝色愈明显;在次生壁中,纤维素已为木质素等覆盖,不变蓝色。

(2)木质素:木质素是以苯丙烷为结构单元通过醚键-碳键彼此连接成具有三维空间结构的高聚物。因为植物细胞壁上的木质都成复合的状态,木质素的显微化学方法虽然很多,但一般只能示知其存在的可能性而已。间苯三酚反应是植物显微化学中确定木质化的最常用和最简单方法:切片先用 1滴盐酸浸透,然后,滴上 1 滴 5%-10%的间苯三酚酒精溶液,木质化细胞壁可现出樱红色或紫红色(因颜色会慢慢褪去而不宜制作永久制片)。染色稍为稳固的方法为硫酸苯胺(或盐酸苯胺)法:在切片上滴上 1 滴硫酸苯胺试剂(硫酸苯胺1g, 蒸馏水 70mL,95%酒精 30mL, 硫酸 30mL), 木质化的细胞壁现出鲜黄色或姜黄色,可制成保持期稍久的永久制片。

(3) 栓质和角质:栓质和角质都是特种高分子饱和或不饱和脂胺酸的衍生物。用碘-硫酸或碘-氯化锌法染色,栓质和角质都可显黄色或浅褐色,但木质、半纤维素等成分也被染成同样的颜色。用苏丹Ⅲ或苏丹 IV)染色,栓质和角质呈现橘红色反应,不过这种反应也并非栓质和角质的特异性反应。

(4) 果胺质:果胺是构成高等植物细胞间质的主要物质,主要由 D 一半乳糖醛酸通过α-1,4-糖苷键连接。检测植物细胞中的果胺质常采用钌红染色法:切片用 0.02% 的钌红水溶液染色10min, 细胞壁中的果胺成分被染成红色。钌红染色时,细胞内的含氮化合物也会着色,但此方法仍不失为检测果胺的好方法,染色后的切片可以用加拿大树胶封固为永久制片。


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