活体光学成像技术之光学活体成像前动物脱毛的必要性
在上几期的文章中，我们分别介绍了荧光成像与生物发光成像的比较、荧光蛋白、荧光染料的挑选方法。当大家选择了合适的标记方法并建立成像模型（药物注射、肿瘤注射等）后，需要对实验动物进行活体成像观察。在成像前，对实验动物进行完全脱毛是非常重要的步骤，直接关系能否获得高质量的成像数据。今天将为大家详细介绍成像前动物脱毛处理的方法与注意事项。
脱毛的必要性
1、毛发会阻挡、吸收和散射光线。特别是黑色毛发比其他颜色的毛发会吸收更多的光，即使是白色毛发也会吸收光线，导致很难检测到荧光信号。近红外波段（NIR
spectrum）的染料在组织中有最小的散射和吸收，但依然会被毛发显著的吸收和散射
[1-2]。研究表明，毛发的存在使皮下注射部位的荧光强度降低了50%
[3]。因此在使用活体成像系统检测前，有必要将实验动物进行完全脱毛以减少对成像信号的干扰。
2、毛发会产生强烈的自发荧光。动物组织特别是毛发和皮肤中存在内源性分子如弹性蛋白（elastin）、胶原蛋白（collagen）、色氨酸（tryptophan）、NADH、卟啉类化合物（porphyrins）、黄素类（flavins）在波长＜600
nm的激发光下会产生强烈的自发荧光[4]。这些自发荧光物质非特异性地被激发光源激发，导致在成像时产生很强的背景信号，将毛发完全脱掉可以有效降低背景信号。
脱毛的材料准备
可以说，对实验动物完全脱毛是活体成像实验的必要步骤之一。首先我们需要准备以下材料备用：
| 物品 | 作用 |
| 理发推剪 | 将大部分毛发进行去除 |
| 脱毛膏 | 去除剩下的绒毛以完全脱毛 |
| 棉签 | 用于涂抹和去除脱毛膏 |
| 温水 | 用于清洗脱毛膏与绒毛 |
| 纸巾或棉球 | 用于清洗脱毛膏和擦拭酒精 |
| 75%酒精 | 用于皮肤消毒、消除脱毛膏的味道防止动物啃咬 |
| 抗生素软膏（备选） | 用于脱毛过程中偶尔的皮肤损伤消炎 |
备注：脱毛膏可选进口品牌如Nair depilatory cream 、国产品牌如贞采源脱毛膏等均可。抗生素软膏可选进口的Taro Pharmaceuticals三联抗生素、国产品牌如红霉素软膏均可。
脱毛的步骤
在准备好材料后，按照以下步骤对实验动物进行完全的脱毛：
1、动物麻醉，将实验动物使用麻醉机进行完全麻醉（可链接到RWD麻醉机的文章）。
2、理发推剪脱毛，将完全麻醉的动物使用理发推剪对感兴趣的成像区域进行脱毛，剔除大部分毛发。
3、用棉签蘸取脱毛膏覆盖在脱毛区域，均匀涂抹后轻轻按摩数秒，等待30秒-1 分钟。
4、用纸巾或棉球用温水沾湿，将脱毛膏顺着毛发的生长方向进行清洗，完全去除绒毛。若此时仍有少量毛发残留，可重新蘸取少量脱毛膏涂抹在毛发上，等待30秒后再清洗脱毛膏。
5、用纸巾或棉球蘸取75%消毒酒精，对脱毛区域进行再次清洁，消除脱毛膏的味道。
6、若皮肤有受伤的部位，涂抹上抗生素软膏，将动物放置在加热垫上等待苏醒。
其他注意事项
脱毛膏已被证明是有效的、无创伤、无毒的，但是使用时依然需要注意时间，过长的涂抹时间会导致皮肤损伤。用75%消毒酒精完全清洗脱毛膏的味道可以防止动物对脱毛部位的啃咬。
皮肤损伤会到导致成像时出现强烈的背景荧光，理发推剪要小心操作，尽量防止大面积的皮肤损伤。
C57BL/6小鼠脱毛后会扰乱正常的毛发生长周期，引起皮肤色素沉着，即皮肤变黑，导致成像信号被极大的衰减（可达到90%）[3]，因此脱毛步骤选择在成像前1~2天进行最佳。此外，如果前期已经对C57BL/6小鼠进行脱毛操作，则在成像前需要观察皮肤色素的沉着情况。
4、可以用剃须刀片代替脱毛膏进行完全脱毛，但是需要练习和小心使用，否则容易割伤实验动物和实验人员。
毛发对成像质量的影响
如图所示，C57BL/6小鼠通过尾静脉注射ICG染料后使用理发推剪进行脱毛（未使用脱毛膏）。黄色框为剃毛较为干净的区域，蓝色框为残留有绒毛的区域，成像结果清楚显示：1、脱毛更加干净的区域信号更强（平均荧光强度5060）；2、残留绒毛的区域荧光信号由于被大量吸收，信号更低（平均荧光强度1050.82）；3、颈部未脱毛区域，基本无无荧光信号（平均荧光强度27.99）。
以上简单的例子即可表明毛发对成像质量的影响！以对腹腔中各脏器进行活体成像为例，标准的脱毛应该如下所示：完全去除绒毛并且脱毛范围需要稍大且不损伤小鼠皮肤。
在对实验动物处理后，就要选择合适的成像设备进行成像。在这里，给大家推荐一款由CELLGENTEK公司研发的活体成像利器：FOBI整体荧光成像系统！内置4种荧光通道和高清真彩色CCD，可对各种常用场景进行高质量成像。
参考文献
1、Temporal Variations of Skin Pigmentation in C57Bl/6 Mice Affect Optical Bioluminescence Quantitation. Allison Curtis et.al. Mol Imaging Biol 13:1114Y1123.2011.
2、Simple generation of hairless mice for in vivo imaging. Yoshikazu Hoshino.Exp. Anim. 66(4), 437–445, 2017.
3、Optical Imaging on the IVIS SpectrumCT System: General and Technical Considerations for 2D and 3D Imaging. Jen-Chieh Tseng. et.al.
4、Hair Removal on Rodents. Johns Hopkins University Animal Care and Use Committee.
