细胞制备流程及转化方法
细胞制备流程及转化方法
1. 转移0.2-1ml培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升摇瓶
2. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时
3. 定时监控OD600值(培养1小时后每半小时测定一次)
4。 当OD600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时)
5. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天)
6. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升)，然后加水稀释至离心管的2/3体积。
7. 照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
8. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
9. 离心，弃上清液
10. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞
11. 照上面步骤离心，小心弃去上清液(沉淀可能会很松散)
12. 用10%甘油重悬浮细胞至zui终体积为2-3ml
13. 将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存
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