实时荧光pcr已运行的室温要求
荧光pcr已运行的室温要求。
实时荧光定量PCR技术具有特异性强，有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点，做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定Ct值，从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量。
技术流程。
一、RNA的提取。
二、DNaseI消化样品RNA中的DNA。
三、RNA琼脂糖凝胶电泳。
四、RNA反转录为cDNA。
Real-TimePCR引物设计的要求。
Tm=55~65℃。GC=30~80%。PCR扩增产物长度：引物的产物大小不要太大，一般在80~300bp之间都可。引物的退火温度要高，一般要在60℃以上。
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