核酸扩增—实时荧光PCR
实时荧光PCR，即在常规PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。实时荧光PCR是目前使用最多的核酸检测方法。 实时荧光PCR技术采用完全闭管荧光检测，无需电泳，有效地解决了常规PCR的污染问题，还可以定量检测标本中的病原体，并且操作更简便、快速，有很高的临床实用价值。但试剂和仪器设备都比较昂贵，临床上应根据患者需要加以选择应用。
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