化学发光法与酶联免疫吸附法进行血HIV检测效果评价
获得性免疫缺乏综合征简称艾滋病（AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus， HIV）引起的一种严重传染性疾病。酶联免疫吸附法（Elisa）最早应用于艾滋病毒的筛查，1985年研制成功的第一代HIV Elisa试剂[2]敏感性和特异性欠佳，至今已发展至第四代。Gag基因编码HIV病毒核心蛋白包括p17、p24、p15[3-7]，P24在血清转换的很短时期内就可以被第四代试剂检测出来，因此第四代HIV Elisa试剂将检测的“窗口期”从三代的22天左右减少到16天左右[8]。
化学发光法（CLIA）的主要原理[9]是将酶免疫发光物质标记在抗原或抗体上，加入氧化剂或酶底物而发光，通过标准曲线测定发光强度来确定待测物的含量。本实验将化学发光法和酶联免疫吸附法两种检测方法进行对比评价。
1 材料与方法
1.1 标本来源收集
本院2014年 3月至 2015年 9月期间所有术前检查病人共计35420例，年龄10～89岁，其中男性24003例，女性11417例。
1.2 试剂
HIV抗原抗体联合检测试剂盒，化学发光酶免试剂，人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型+p24）抗体免疫印迹试剂盒（简称WB，新加坡 Genelabs）。 1.3 方法
1.3.1 Elisa法检测HIV病毒 Elisa检验血清HIV抗体采用双抗原夹心法。包被：将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/mL，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1mL，4℃ 过夜。第二天，弃孔内溶液，缓冲液洗涤；加样：加待检样品于上述反应孔中，置37℃孵育1h（同时做空白孔、阴性对照孔及阳性对照孔）；加酶标抗体：在各反应孔酶标抗体37℃孵育1h，缓冲液洗涤；加底物液显色：向各反应孔中加TMB底物溶液，37℃ 10min；终止反应：于各反应孔中加入硫酸。
1.3.2 CLIA法检测HIV病毒 CLIA法检验模式为双抗原夹心一步法免疫分析，借助于HIV（1+2）抗原制作出固相抗原，并将HIV（1+2）抗原采用辣根过氧化物酶进行标记，由此和待测样品中的HIV抗体两者就可以形成双抗原夹心，洗涤之后，将化学发光底物液加入其中 ，测定其发光值。
1.3.3 免疫印迹检测法（WB）检测HIV病毒 HIV进行培养、浓缩、纯化；HIV抗原在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳按照分子量大小而分离；将分离的抗原转移到硝酸纤维素膜上，将其切割成包含全部病毒蛋白的按照分子量大小排列的条膜；在反应槽中加待测样品与条膜孵育，洗涤；加辣根酶标记的二抗；加显色试剂。
1.4 判断标准
化学发光法：S/CO≥1.00 为阳性，500 时，WB确认实验 均为HIV阳性；CLIA 检测结果S/CO值≤500时，WB确认实验有可能为阴性；S/CO值越低，W B检测结果为阴性的可能性越大。
3 讨论
据报道[10]全球约有3亿多人携带艾滋病毒，而我国在1985年发现首例艾滋病患者，到2014年二十年时间，患病人数已经达到10.4万例，患者分布也从单一省份扩增到全国20多个省。性传播、 经血传播和母婴垂直传播[11-13]是人类感染HIV病毒的三条途径，而血液传播是主要途径。因此早期筛查血液HIV病毒，对HIV患者的早诊断具有重要价值。
1998年Elisa第四代试剂问世，第四代Elisa试剂可以同时检测p24抗原和HIV 1+2抗体，有效缩短了“窗口期”，因此得到广泛应用。但是由于一项检测同时与病毒、抗体结合，增加了相互干扰的机会，从而降低了第四代Elisa试剂的灵敏度和特异性[14-15]。而化学发光法[16-17]作为新型的免疫学检测技术，因其灵敏度高较高。
从本实验结果来看，化学发光法的真阳性率高于Elisa法，说明化学法试剂能在HIV病毒抗体效价较低时发挥作用，检测患者HIV阳性，因此更有效避免临床漏诊现象。但是我们发现化学发光法的假阳性率也有所增加。通过对比S/CO不同区间，化学发光法的假阳性率发生在S/CO≤500并且随着S/CO值降低，假阳性率升高明显。因此在用化学发光法筛查血液HIV病毒，在S/CO值比较低时，应注意对此病例的复检，同时加做WB，避免假阳性的情况出现。
综上所述，化学发光试剂灵敏度高，操作简单，非常适合血液HIV病毒的早期筛查。但是应注意假阳性率高的问题，通过进一步实验进行确认，提高HIV筛查质量。
