台式高分辨率质谱系统快速鉴定药物杂质（一）
前言
杂质分析对于药物的研发至关重要1。在研究过程中，杂质谱信息能帮助药物化学家优化合成路线和避免潜在的有毒杂质。在开发过程中，当大量母体化合物存在时，鉴定和表征痕量杂质至关重要，从而促进了高分辨率、高灵敏度和高扫描速度的HR-MS 仪器和智能化结构鉴定软件的发展。
为了展示HR-MS 在杂质分析和结构鉴定方面的能力，本文选用了市售药物奥美拉唑。本研究采用了赛默飞世尔科技的Q Exactive 台式Orbitrap 质谱仪和数据处理软件Mass Frontier 来快速分析和鉴定奥美拉唑中杂质的结构。
方法
材料与试剂
奥美拉唑（CAS# 73590-58-6）购自Sigma-Aldrich，产品号O104-100MG。
乙腈和水来自Fisher Scientific
乙酸铵购自Sigma-Aldrich，产品号73594-25G-F。
甲酸购自Sigma-Aldrich，产品号33015-500ml。
样品前处理
奥美拉唑溶液（0.5 mg/mL）配制在1:1 乙腈/ 水混合溶剂中。
HPLC 方法
色谱分离采用Ultimate3000 UHPLC 系统。
色谱柱：Hypersil GOLD 柱，2.1mm×150mm，粒径3 μm.
柱温：35 ℃，流速：0.5 mL/min，进样体积：8 μL
流动相：A - 水；B - 乙腈；C -100 mM 乙酸铵，用乙酸调节pH 值到5
梯度洗脱：
质谱方法
质谱分析采用 Q Exactive 质谱仪的电喷雾正离子模式。在70,000 和 35,000 分辨率FWHM@m/z 200 下分别采集高分辨全扫描一级质谱数据和数据依赖Top3 二级质谱数据。
离子源条件：
离子化模式：正离子ESI
离子源：HESI-II
鞘气流速：45 单位N2
辅助气流速：10 单位N2
喷雾电压（KV）：+3.5
毛细管柱温度（℃）：320
S-lens RF 水平：50.0
加热器温度（℃）：400
Q Exactive 方法参数：
AGC 目标（全扫描）：3e6
AGC 目标（MS/MS）：1e5
NCE：30，35% 阶梯变化
扫描范围（全扫描MS）：180 到1200 amu
结果与讨论
I.高分辨率全扫描-HCD MS/MS 鉴定杂质
采集得到奥美拉唑的高分辨率全扫描和三个最高强度的数据依赖HCD MS/MS 数据。HRAM 全扫描和MS/MS 数据提供了分子量和碎片信息。HCD（高能量碰撞解离）得到了丰富的MS/MS 碎片和低质量端碎片信息。利用Mass Frontier 软件与这些信息互相配合，我们不仅快速检测出奥美拉唑的主要杂质，而且可靠地测定了相应的元素组成，如图1&2 和表1 所示。
图1. 奥美拉唑的质谱总离子流图
