使用复合模式SPE技术去除血浆样品中的聚乙二醇400（一）
引言
PEG
400等药物赋形剂通常被加入到制剂中以促进其在介质中溶解。然而，这些化合物却可引发显著的基质效应，尤其是在LC/MS/MS分析中产生的离子抑制效应。常规药物研发流程中使用的快速LC梯度方法，容易导致此类化合物和目标分析物的共流出。由于这种共流出物已被证实是导致离子抑制效应的主要原因，因此在早期药代动力学（PK）研究中，赋形剂浓度偏高可能会带来棘手的问题1-3。为尽量减少这一问题引发的不良影响，目前已研究出的方法包括：LC梯度调节2,3，分析色谱柱的选择1，样品制备策略的方法开发1-3，样品稀释5，甚至是全新制剂药的开发4。即便其中部分方法已取得成效，他们也存在各自的局限性。很显然，分析员通常无法自己选择制剂药赋形剂。无论是改变梯度或流动相，还是色谱柱的选择，LC条件的优化都能够针对部分分析物解决这一问题，但它既无法应用到全部分析物，也需要更多的方法开发作为辅助支持。同时，对LC运行条件的过多优化并不利于高通量分析。有研究人员指出，
“若能开发出一种更优化的固相萃取（SPE）方法，便可实现有效的净化效果。 ” 3
针对以上问题，本应用纪要通过使用Oasis复合模式阳离子交换（MCX）SPE方法提供了一种可以快速、便捷、高效的解决方案。碱性分析物通过强阳离子交换作用被吸附在填料中，而如PEG等非离子型的赋形剂则通过反相机理被吸附，同时能够在分析物洗脱之前被选择性去除。
实验
样品制备
标准品包含：醋丁洛尔、美托洛尔、拉贝洛尔、咪达挫仑。这些成分分别加入到空白血浆中、调整其浓度至200ng/mL，或是后加标到萃取后的空白血浆洗脱液中，用于回收率的计算。PEG400也是分别加入到空白血浆中调整其浓度到到5mg/mL或者后加标到萃取后的空白血浆洗脱液中用于确定回收率。
样品按照Oasis® MCX的标准操作流程进行萃取。简单来说，在0.5mL兔血浆中加入0.5mL 4% H3PO4进行酸化。（注意：本研究中采用的是0.5mL血浆，采用更小剂量亦可）。MCX96孔板在经过1.0mL MeOH和1.0mL H2O活化平衡之后，经酸化的样品被上样到填料中．上样后，使用1.0mL 2%甲酸和2×1.0 mL MeOH清洗。样品使用2×250μL含5%NH4OH的MeOH溶液进行洗脱。 “后加标”（PS）样品是在空白兔血浆洗脱液中加入标准品或标准品与PEG 400的混合物。经萃取的样品则以以下方式制备：在未经萃取的血浆中加入200ng/mL标准品、或在其基础上再加入5 mg/mL PEG 400。
PEG去除的回收率依据以下算式得出：% 回收率 =（萃取样品峰面积/后加标样品峰面积）×100% 为进行PEG去除的相关分析，样品按照1:200的比例在流动相中进行稀释，以避免高浓度PEG400给质谱仪带来的污染。
方法条件
SPE条件
SPE板： Oasis MCX 96孔板30 μm （30 mg），部件编号：186000248
液相色谱条件
液相色谱系统：沃特世ACQUITY UPLC系统
检测：沃特世ACQUITY®SQD
样品瓶：2 mL 96孔收集板；部件号 WAT058958
色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm，2.1 x 50 mm，部件号：186002350
柱温： 30摄氏度
样品温度：10摄氏度
进样量：10μl
流速： 0.5 mL/min.
流动相A（MPA）：0.1% HCOOH水
流动相B （MPB）：0.1% HCOOH乙腈
初始流动相条件为95:5 MPA:MPB。持续0.5分钟，MPB在2.5分钟之后增至90%。MPB比例随后降回5%，并持续2分钟，重新平衡色谱柱。总运行时间5.0分钟。
质谱条件
质谱系统： 沃特世ACQUITY SQD
电离模式： （+） ESI
采集范围： SIR
毛细管电压：2.5 kV
锥孔电压： 根据化合物有所区别 （针对不同分析物进行优化）
脱溶剂气体：700 L/min
锥孔气： 0 L/min
