核细胞分离的原理及分层液法的分离步骤
单个核细胞PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076～1.090；血小板为1.030～1.035。因此，利用一种密度介于1.076～1.090之间、近于等渗的溶液(分层液)进行密度梯度离心，可使不同类别的血细胞按其相应密度分布，从而被分离。
Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 (polyvinyl pyrolidone, PVP)处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。
1、将1份10XPBS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100%Percoll悬液，其密度为1.1294g/ml。用PBS或细胞培养液稀释100%Percoll而获得所需密度的Percoll分离液用于相应细胞的分离。若分离淋巴细胞应使用1.0777g/ml，配制时用稀释液稀释60%即可。
2、 取比重1.077的Percoll分离液X ml与离心管中，将等倍稀释的抗凝血1/2 X ml 小心叠加在分离液上，经水平离心(1500rpm)后，便得四个细胞层，从而分离出淋巴细胞。表层为死细胞残片和血小板，底层为粒细胞和红细胞，中间有两层，上层富含单核细胞，下层富含淋巴细胞。
3、 该法是纯化淋巴细胞和单核细胞的一种较好的方法，淋巴细胞纯度高达98%，单核细胞纯度可达78%。
文章链接：仪器设备网 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-2581.html
推荐
