层析技术概念、原理、分类（凝胶层析和离子交换层析）
一．概念
利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。
本世纪初（1903年），俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化、分子生物学及其它学科领域有效的分离、分析工具之一。
二．原理
具体过程：
可分离物质：糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。
三．分类
1．按两相所处物理状态分类
气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体
液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体
2．按层析方式分类
柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离
薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄板上，点样后，用流动相展开
纸层析：用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开
3．影响凝胶柱层析的主要因素
①层析柱的选择与装填
层析柱的大小应根据分离样品量的多少及对分辨率的要求而定。凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无汽泡。
②流动相――洗脱液的选择：是含有一定浓度盐的缓冲液，目的是为了防止凝胶可能有吸附作用。其选择主要取决于待分离样品，一般来说只要能溶解洗脱物质，并不使其变性的缓冲液都可用于凝胶层析。
③加样量：加样量的多少应根据具体的实验而定：一般分级分离时加样量约为凝胶柱床体积的1％－5％，而分组分离时加样量约为凝胶柱床体积的10%-25%.
④凝胶再生：葡聚糖凝胶再生使用NaOH（0.2M）和NaCl(0.5M)混合液处理。
五．离子交换层析
离子交换层析是利用固定相偶联的离子交换基团和流动相解离的离子化合物之间发生可逆的离子交换反应而进行的分离方法。
1．原理
离子交换交换层析是利用离子交换剂对各种离子的亲和力不同，借以分离混和物中各种离子的一种技术。其主要特点是依靠带有相反电荷的颗粒之间的吸引力的作用。
离子交换层析的固定相是载有大量电荷的离子交换剂，流动相是具有一定pH值和一定离子强度的电解质溶液。
离子交换剂按其所带电荷性质，分为：
阴离子交换剂带正电荷，与混合物中带负电的组分结合 阴离子交换层析。
阳离子交换剂 带负电荷，与混合物中带正电的组分结合 阳离子交换层析。
常用离子交换剂有：离子交换树脂，离子交换纤维素等。
本实验用到的是二乙基氨基纤维素即DEAE-纤维素，属阴离子交换剂带正电荷，结合离子。
分离过程：也是柱层析，原理以阴离子交换层析为例。
