庆大霉素（Gentamicin）ELISA检测试剂盒说明书
一、概要
庆大霉素(Gentamicin, GEN)属于氨基糖甙类抗生素，主要作用于革兰氏阴性细菌，由于其抗菌谱广、疗效佳且价格低廉而广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂。但GEN的血清有效浓度与毒性浓度很相近，安全范围较小，在其应用过程中易产生毒副作用，尤其大剂量不规范使用，易导致动物性食品中GEN残留超标，对人体健康构成危害，对脑神经、听觉以及肾脏的损害严重。现有的检测庆大霉素方法如色谱法或色谱-质谱联用技术其样品前处理复杂、所需仪器昂贵、操作复杂、耗费时间。而使用庆大霉素ELISA试剂盒能够既快速又准确的分析样品中庆大霉素残留。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于50min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被庆大霉素抗原，样品残留的庆大霉素和微孔条上预包被的抗原竞争抗庆大霉素抗体，加入酶标二抗后，加入TMB底物显色，样品吸光值与其残留物庆大霉素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中庆大霉素的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测牛奶、动物组织等样品中庆大霉素的残留量。
四、交叉反应率
庆大霉素……………………………………………………100％
五、检测步骤
测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。
5 加标准品/样品：加标准品/样品50l/孔到对应的微孔中，然后加入庆大霉素抗试剂50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300l/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、加酶标物：加入庆大霉素酶标物100l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。
8、显色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。
9、测定：加入终止液50l/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.1ppb
样品最低检测限：
组织………………………………………………3ppb
牛奶…………………………………………… 3.5ppb
回收率：
组织…………………………………………………80±10%
牛奶………………………………………………… 80±10%
精密度：
试剂盒的变异系数均小于10%
七、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样品没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长），但不得超过30min。反之，则减短反应时间。
9、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
八、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。
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