单核细胞增生李斯特菌感染检测方法大盘点
单核细胞增生性李斯特菌 （L.monocytogenes）属于李斯特菌属（Listeria）, 是一种人兽共患的病原菌，能引起人和多种动物共患的李斯特菌病。李斯特菌在自然界广泛存在，食品中存在的单核细胞增生性李斯特菌对人类的安全具有危险， 并被列为 21 世纪对中国人卫生健康具有重大影响的 12 种病原微生物之一。因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视 。本文对当前李斯特菌感染的实验室检测方法进行总结，以供研究参考。
1.传统的细菌分离鉴定
国家标准中EB增菌法和LB增菌法，通过微生物的分离培养、生化反应、溶血试验、协同溶血试验、动物试验等进行分离鉴定。实验设备要求不高，可操作性强，但检验周期长，需6-7d。这种传统的检测方法已无法满足食品生产过程中的在线检测、食品上市和消费前的快速检测的要求。
2. 免疫学检测
免疫学方法是基于抗体、抗原的天然密切关系， 只需少许样品纯化就可以精确检出抗原， 不易受基质影响， 并且可以提供实时信息。 目前已有的检测方法诸如酶联免疫吸附剂测定 （ ELISA ）、 酶联荧光分析法 （ ELFA）、同位素标记抗体法 （放射免疫 ）及其它多种方法， 如乳胶凝集、免疫传感器、免疫扩散及免疫色谱技术等。这些方法具有操作简便、快速的特点。但由于单克隆抗体费用昂贵，所以用ELISA盒进行多种食品样品的检测费用较高。
3. 分子生物学检测
近十年来以分子生物学为基础的检测方法迅速发展起来， 诸如 DNA探针、 PCR（聚合酶链反应 ）和 DNA芯片 （DNA microarray）等方法都得到了广泛应用。
3.1 PCR检测方法
用于PCR检测的特异引物， 一种是依据单增李斯特菌的特异毒力基因序列设计， 常以hlyA、iap、inl、Dth-18作为靶序列。Graham等用16S/23 SrRNA基因中间保守区域进行PCR扩增，对单增李斯特菌的特异性进行了研究，为检测提供了依据。王海艳等根据单增李斯特菌的hly基因和李斯特菌属的l6R NA基因各设计了一对引物，用两对引物组合建立了PCR方法来检测人工污染的食品，检测限最低达1 cfu/25g。
金大智等采用实时荧光PCR技术对单增李斯特菌进行了快速检测。方法是用Taq酶切断探针，产生荧光信号。结果能测出李斯特菌属的各个血清型，灵敏度较高。Bhagwat等用多重PCR可以同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和E.coli O157:H7。Dunbar等用生物素标记引物，通过荧光方法来、分析PCR产物，大大缩短了检测时间。Choi和hong用hlyA基因序列为靶模板进行竞争PCR，在没有增菌的情况下可以在5h内测出103cfu/0.5mL的牛奶样品。
3.2 全自动微生物分析系统检测
国内外现在已有很多全自动微生物分析系统问世，如Vitek系统、Biolog系统 、Midd系统、Sensititre系统、Autosceptor系统及Mocroscan系统。其中BITEK-AMS的微生物鉴定系统已被国际分析化学协会（ AOAC）列为法定分析法。
展望
随着学科的交叉， 食源性致病菌的检测一方面向综合的方向发展， 即集多种技术于一体的多功能、全自动化大型检测仪器不断出现； 另一方面， 针对单个菌种和菌属的新型培养基、免疫试剂盒和分子试剂盒也会不断推向市场。相信随着对单增李斯特菌的全方位深入了解和认识， 更完美的检测工具会不断出现。
参考文献：
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