腺苷脱氨酶的检测方法演变介绍
近十几年来，随着对ADA的深入研究，检测方法也不断发展。目 前已发展了四代。
第一代ADA测试
ADA将腺苷 （Adenosine） 脱氨产生次黄苷（Inosine） 和氨 （NH3）。一个ADA活性单位在测试特定条件下每分钟脱氨1μmole腺苷成为次黄苷。通过动态测量腺苷265nm处吸光度下降的速度，可以测算ADA的活性大小。Kaplan法 （1955） 由此建立。由于高底物浓度造成吸光度过高，该法仅适用于腺苷浓度低于40μM。如此低的底物浓度达不到底物饱和要求，造成ADA活性检测失真。因此，该法不适用于临床应用。
第二代ADA测试
原理为腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解，产生次黄嘌呤核苷和氨。然后用Berthelot显色反应（1859）测定反应过程中产生氨的量，从而计算血清ADA活性单位。所需试剂易配制，仪器简单，但灵敏度低，易受外源性NH3影响，空白过高，不能直接测定红细胞ADA活性。
同样原因，ADA偶联谷氨酸脱氢酶（Glutamate Dehydrogenase， GLDH）反应：
通过测量340nm处NADPH吸光度下降的速度来测算ADA活性。该法也因血清含氨干扰，以及测试系统中过高NADPH造成非特异性氧化而无成算。
第三代ADA测试
Kalckar氏应用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶（Purine nucleoside phosphorylase，PNP） 和黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase， XOD） 反应连续监测法。通过测量293nm处尿酸盐吸光度上升的速度来测算ADA活性。
但是，293nm时血清吸光度太高，造成临床应用不便。
第四代ADA测试
通过ADA偶联PNP，XOD，过氧化氢酶（Catalase）和醛脱氢酶（Aldehyde dehydrogenase），借助过氧化氢（H2O2）反应测量334nm处NADPH吸光度上升的速率来测算ADA活性。该法克服了以往ADA测试的困难，然而，鉴于试剂成本高，阻碍实际临床使用。
最新对第四代测试方法的改进为偶联PNP，XOD和过氧化物酶（Peroxidase， POD）反应。ADA酶解腺苷（Adenosine）脱氨产生次黄苷（Inosine）；再通过PNP的作用，生成次黄嘌呤（Hypoxanthine）；后者在XOD氧化下生成尿酸（Uric Acid）和过氧化氢（H2O2）；最后在POD的作用下H2O2再与N-Ethyl-N-（2-hydroxy-3-sulfopropyl）-3-methylaniline （EHSPT）、4-氨基安替比林（4-aminoantipyrine， 4-AA）反应（Trinder氏反应），生成紫红色的有色醌（Quinone dye）。通过动态测量有色醌550nm处吸光度上升的速度来测算ADA的活性。从反应原理可知NH4+对该法无影响。其原理反应方程式如下：
反应具有测定精密度高，抗干扰能力强，适合自动化快速测定的特点，为临床常规开展ADA检测应用创造了有利条件。
迈克腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂盒性能指标
检测方法：XOD-PAP法（第四代改良法），不与其它核苷反应，无NH4+影响，灵敏度高。
剂 型：液体双试剂，直接使用，避免复溶引起瓶间差。
线性范围：0～200U/L，γ2≥0.99
准 确 度：不准确度正常水平≤15%，异常水平≤10%。
稳 定 性：密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月，开瓶上机2～8℃避光稳定30天。
抗干扰能力：标本中胆红素≤342umol/L，血红蛋白≤200mg/dl，甘油三酯≤8.47mmol/L，抗坏血酸≤4mg/dl 及NH4+对本试剂测定无影响。
适 用 性：适用于各种半/全自动生化分析仪。
参考范围：4～22U/L（37℃），建议各实验室建立自己的参考值范围。
