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南非叶的繁殖方式

2023.5.06

  外植体采集:选取生长健壮、无病虫害的优良植株,剪取木质化程度较轻的当年生嫩枝为外植体;

  外植体消毒:将采回的茎段截成长1.2-1.5厘米的带节小段,剪去叶片,只保留叶柄基部(长约0.5厘米),流水冲洗20分钟备用;在超净工作台上,用75%酒精浸泡10秒,0.1%升汞振荡消毒8分钟,再用无菌水冲洗5次洗去残留药液,用无菌滤纸吸干水分后,切去茎段两端和叶柄上部少许(保留长度约0.2厘米),备用;

  初代培养:即诱导无菌芽,在超净工作台上将外植体消毒得到的外植体茎段接种于诱导培养基上,诱导培养基为MS基本培养基附加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5毫克/升和萘乙酸(NAA)0.05毫克/升,即MS+6-BA0.5毫克/升+NAA0.05毫克/升,蔗糖和琼脂粉添加量分别为每升培养基30克、6克,灭菌前培养基pH调整为6.0,培养室温度为(23±2)℃,光照强度1500-2500勒克斯,光照时间为12小时/天;在诱导培养基中,侧芽易于诱导且生长迅速,诱导率可达70%,以春夏季消毒效果更佳;初代培养3周时,侧芽可高达3-4厘米,具3张以上叶片,可转入继代培养基进行继代培养;

  继代培养:待无菌芽生长至3-4厘米时,将其分段切割,逐段转入继代培养基进行培养,每3周左右继代转接一次;培养室光照时间为16小时/天,其他培养条件同初代培养;光照强度为1500-2500勒克斯时,光照时间16小时;继代培养基为MS-z+6-BA0.2毫克/升+IBA0.05毫克/升+PP3330.05毫克/升,所述的MS-z培养基每升中所含的组分及浓度(毫克/升)如下:

  大量元素:硝酸钾1900、硝酸铵412.5、二水氯化钙880、七水硫酸镁370、磷酸二氢钾170、七水硫酸亚铁27.8、乙二胺四乙酸二钠37.3;

  微量元素:四水硫酸锰22.3、七水硫酸锌8.6、硼酸3.1、二水钼酸钠0.25、碘化钾0.83、五水硫酸铜0.025、六水氯化钴0.025;

  有机物:肌醇100.0、甘氨酸2.0、盐酸吡哆醇(VB6)0.5、烟酸0.5、盐酸硫胺素(VB1)0.1;

  其它:琼脂8000、蔗糖40000、pH6.0;

  生根培养:选取叶片数4片以上、高度2厘米以上的试管苗转入生根培养基进行培养。生根培养基选用1/2MS作为基本培养基(仅大量元素减半),附加吲哚丁酸IBA0.1毫克/升,即1/2MS+IBA0.1。光照时间为每天16小时,以促使植株健壮。生根培养2周时,生根率可达100%,株高5厘米左右,植株生长健壮,根系发达。

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