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杆状病毒转染载体的分类

2022.11.20

用于表达融合型蛋白的转染质粒

是一类早期构建的转染质粒,它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每个载体中,多角体蛋白基因启动子下游ATG启始密码后含有一个单一的BamHⅠ酶切位点,当外源基因和多角体基因的读码框架正确时,就可以获得含1个或几个多角体蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。

用于表达单一非融合蛋白的转染质粒

由于外加的多角体蛋白或其它的氨基酸可能对外源蛋白的生物活性或细胞定位产生影响,所以用于表达非融合型蛋白的转移载体被广泛应用。几种不同的策略被用于设计高水平表达非融合蛋白的转移载体:

(1)如pAcRP[5]系列等,都在多角体基因启动子启始密码ATG上游引入一个单一的限制性多克隆位点;

(2)如pAcYM1[6]和pEV55及其衍生物中都含有所有的多角体基因上游非翻译序列(包括启始密码子ATG中的A以及其后跟着的单一限制性克隆位点或多克隆位点),这样就可以避免由于5′端非翻译前导序列的缺失而影响mRNA的稳定性;

(3)如pVL941、pVL1392、pVL1393[7]等,是将融合载体pAC311多角体基因启动子下游启始密码ATG改变为ATT。这样,插入的外源基因必须含有自身的ATG,并从此开始翻译,而多角体基因启动子驱动的mRNA转录后产物稳定水平不受影响。

用于表达多个非融合蛋白的转染载体

这种载体的主要特征是含有2个或2个以上相同的启动子,可表达2条或2条以上多肽链的蛋白。

如Emery和Bishop[8]等构建的pAcVC2转染质粒,含有两个方向相反的多角体基因启动子。重组病毒可同时表达多角体蛋白和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV) N蛋白。Takehara[9]等构建了可插入两种外源基因的双重表达载体。该类载体也是利用两个相同的多角体基因启动子,使获得的重组病毒同时表达两种产物。Takehara等因此成功地表达了HBVsAg和HBeAg。


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