HRP底物归类以及操作流程
二氨基联苯胺／金属盐
DAB是辣根过氧化物酶最比较敏感、常见的底物。它造成明显的深棕色物质，在水和醇中不融解。大部分状况下，强烈推荐在DAB中添加不一样的金属正离子。当添加金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶能够更为比较敏感。该类反映物质呈暗灰蓝色至灰黑色，且在水及醇中平稳。DAB／金属盐染色剂运用的机构染色剂范畴范围广。
1. 必须的溶液和独特机器设备
DAB，0.05 mol／LTris缓冲液(pH7.6), 0.3％ (W/V) 氯化镍/水存储液, 30％双氧水, DPX, 光学显微镜(一般含有数码相机便于于纪录結果).
2. 操作流程
(1) 用 9 mL 0.05 mol/L Tris缓冲液(pH7.6)融解6 mg DAB；
(2) 加 l mL 0.3％(W/V)氯化镍/水存储液(还可以用相等的氯化钴取代)；
(3) 加0.1 mL 3％双氧水。双氧水通常以30％的溶液出示，存储在4 ℃，此标准能够不断1六个月；
(4) 假如出現沉定，用过滤纸过虑；
(5) 加此溶液至标本采集，并孵育1~20 min手洗停止反映；
(6) 提升：假如必须可复染；
(7) 用DPX封片。
氯萘酚
氯萘酚能够产生这种蓝黑色物质。敏感度小于DAB，且物质可溶解醇中。它适用当DAB反映产生较高背景图或规定更改物质的色调。
1. 必须的水溶液和独特机器设备
0.03％氯萘酚，用无水乙醇融解(存储在-20℃)，0.05 mol／LTris(pH7.6)，双氧水，Gelvatol或是Mowiol，光学显微镜(一般含有数码相机便于于纪录結果)。
2. 操作流程
(1) 氯萘酚存储液的提前准备：用10 mL无水乙醇融解0.3 g氯萘酚，存储于-20℃；
(2) 加100 μL 氯萘酚存储液至10 mL 0.05 mol/LTris(pH7.6)；
(3) 加0.1 mL 3％双氧水于水里。双氧水通常要以30％的水溶液出示，4℃可储放1六个月；
(4) 乳白色沉定能用过滤纸过虑除去；
(5) 加此水溶液到标本采集中，并在室内温度孵育10～40 min，手洗停止反映；
(6) 提升：假如必须，开展复染，但只可应用水溶染剂；
(7) 用Gelvatol或是Mowiol封片。
氨乙基咔唑
氨乙基咔唑(AEC)造成鲜红色物质，其敏感度小于DAB，但可用以DAB反映造成较高背景图或规定更改物质色调的试验。此物质可溶解醇，但不溶解水。
1. 必须的水溶液和独特机器设备
0.4％ AEC用 N,N—二甲基甲酰胺(DMF)融解， 0.1 mol/L乙酸钠缓冲液(pH5.2)，双氧水， Gelvatol或Mowiol，光学显微镜(一般含有数码相机便于于纪录結果)。
2. 操作流程
(1) 用 l mL DMF融解 4 mg AEC。AEC在DMF中平稳，因而，能够用100 mL DMF融解0.4 g AEC做为存储液预留；
(2) 加 l mL AEC水溶液至15 mL 0.1 mol/L的乙酸钠缓冲液(pH5.2)中，并拌和；
(3) 加0.15 mL 3％双氧水于水里。双氧水通常是30％的水溶液出示，在4℃可储放1六个月；
(4) 用过滤纸过虑；
(5) 加此水溶液到标本采集中，并且于室内温度孵育10～40 min，手洗停止反映；
(6) 提升：假如必须复染，只能用水溶染剂；
(7) 用Gelvatol或Mowiol封片。
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