细菌鉴定碳水化合物代谢试验应用及意义
(醇、苷)类发酵试验
(1)原理：不同种类含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶，因而对各种糖(醇、苷)类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖(醇、苷)类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖(醇、苷)降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。
(2)培养基：培养基中加入0.5%-1%的糖类(单糖、双塘或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)苷类(水杨苷等)。培养基可为液体、半固体、固体或未量管几种类型。
(3)方法：将分离的纯种细菌无菌操作接种到糖(醇、苷)类发酵培养基中，置培养箱中培养数小时至两周，观察结果。
(4)结果：接种的细菌，若能分解培养基中的糖(醇、苷)产酸，培养基中的指示剂呈酸性反应(如酚红变为黄色)，产气的细菌可在小倒管中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖，培养基中除有细菌生长外，无变化。
(5)应用：糖(醇、苷)类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖(醇、苷)类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。
氧化-发酵试验
(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型;能进行无氧降解的为发酵型;不分解葡萄糖而分解蛋白胨的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵(O/F或Hugh-Leifson，HL)试验，可用于区别细菌的代谢类型。
(2)培养基HL：Hugh-Leifson培养基。
(3)方法：将待检菌同时穿刺接种于两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体状石蜡，置于35℃培养48小时或更长。
(4)结果：两管培养基均无变化为产碱型或不分解糖型(不产酸、颜色不变为阴性);两管都产酸(变黄)为发酵型;若仅加液体石蜡的培养基产酸为氧化型。
(5)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌(发酵型)与微球菌(氧化型)。
β-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)
(1)原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黄色的邻-硝基酚，很低浓度也可以检测。
(2)方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分混匀，使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20分钟-3小时，观察结果。
(3)结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，无色为阴性。一般在20-30分钟内显色。
()应用：可用于迟缓发酵乳糖细菌的快速鉴定，本法对于迅速及迟缓分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为试验阳性，而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。
七叶苷水解试验
(1)原理：在10%~40%胆汁存在下，测定细菌水解七叶苷的能力。七叶苷被细菌分解生成的七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子发生反应形成黑色化合物，是培养基呈黑色。
(2)方法：将被检菌接种于七叶苷培养基中，35℃孵育18~24h后，观察结果。
(3)结果：培养基完全变黑为阳性，不变黑为阴性。
(4)应用：主要用于鉴别D群链球菌与其它链球菌的区别，以及肠杆菌科的某些种、某些厌氧菌(如脆弱拟杆菌等)的初步鉴别。D群链球菌本试验为阳性，其它链球菌为阴性。
甲基红(MR)试验
(1)原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质(如醇、醛、酮、气体和水)，培养基pH仍在6.2以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色，为阴性。
(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
(3)方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。
(4)结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔红色为弱阳性。
(5)应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
V-P试验
(1)原理：测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而与培养基内蛋白胨中的精氨酸等含胍基的物质结合形成红色化合物。即V-P试验阳性。
(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
(3)方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，35℃孵育48h，加入6%α-萘酚乙醇溶液和40%KOH，振摇。
(4)结果：在数分钟内出现红色者为阳性，如无红色出现且于35℃4小时后仍无红色为阴性。
(5)应用：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。本试验常与甲基红试验一起使用，一般情况下，前者为阳性的细菌，后者常为阴性，反之亦然。但肠杆菌科细菌不一定都这样规律，如蜂房哈夫尼亚菌和奇异变形杆菌的VP试验和甲基红试验常同为阳性。
