补体结合试验的注意事项及检查过程
注意事项
操作应仔细准确；玻璃器材必须非常清洁；参与试验的各项已知成分必须预先滴定其效价，配制成规定的浓度使用，才能保证结果可靠。
检查过程
(1)血素的滴定：
①取补体1ml，加BBS9ml，依次稀释成1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，1∶60，1∶80，1∶100，1∶200，1∶400，同时取50%的溶血素0.2ml，加BBS9.8ml，即为1∶100的溶血素，然后继续稀释成1∶800，1∶1600，1∶3200，1∶6400。
②采取方阵排列试管，纵行各管加不同浓度的补体0.1ml，横排各管加溶血素0.1ml(皆应从最高稀释度加起)混匀后，各管加BBS 0.2ml，补体和溶血素对照管各加BBS 0.3ml，最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml。各管总量为0.5ml，摇匀，放37℃水箱中30min，观察结果。
以完全溶血的补体和溶血素最高稀释度为各自的单位。在实际应用时，溶血素用2U(3200÷2=1600)，补体用2.5U(80÷2.5=32)。
(2)正式试验：
①用V型微量反应板操作，每份标本作一个试验孔。一个血清对照孔。各孔内先加BBS 0.025ml。
②用稀释棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔，旋转后移入第二孔，共八孔，如此可得1∶2～1∶256稀释。
以小量法测定抗体的补体结合试验为例。逐步加入各种试剂，温育后先观察各类对照管，应与预期的结果吻合。阴性、阳性对照管中应分别为明确的溶血与不溶血；抗体或抗原对照管、待检血清对照管、阳性和阴性对照的对照管都应完全溶血。绵羊红细胞对照管不应出现自发性溶血。补体对照管应呈现2U为全溶，1U为全溶略带有少许红细胞，0.5U应不溶。如0.5U补体对照出现全溶表明补体用量过多；如2U对照管不出现溶血，说明补体用量不够，对结果都有影响，应重复进行试验。补体结合试验结果，受检血清不溶血为阳性，溶血为阴性。
