大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验——离心法
对于某些用途来说(如体内感染细胞),有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞,必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 将产病毒细胞按1:10或1:20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中,培养细胞至50%~90%汇片。
3. 收取上清,用0.45 μm 的滤器过滤,贮存于-70℃或-80℃,或马上进行滴定和浓缩。
4. 滴定病毒原液。
5. 对于大体积病毒原液,用无菌的250 ml 离心瓶和JA-14转子在4℃,25 000 g 离心20 min,对于小体积的病毒原液,用SW-27或SW-41Ti转子20 000 r/min 离心10 min。使用前,用70%乙醇淋洗离心管以防细菌污染。
6. 将上清直接倒入消毒的离心瓶中,用JA-14转子14 000 r/min 离心5~16 h,或用SW-27或SW-41Ti转子20 000 r/min 离心2 h。
8. 将病毒分装成5~50 μl 的小份,贮存于-70℃或-80℃。滴定经浓缩的或未经浓缩的病毒各1份。 |
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项目成果