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根际pH的显色测定实验

2020.8.24

实验方法原理 本方法是利用pH指示剂在不同酸碱度条件下变色的特点,测试根际pH的变化。将pH指示剂加入到具有一定营养条件下的琼脂溶胶中,组成琼脂-指示剂混合液。植物根系可直接利用其作为介质生长。由于根系的吸收和溢泌等生理活动,使根际pH不同于原介质,由此产生不同的显色反应。对照标准pH变色范围,可以确定根际pH上升或下降的幅度及数值。

实验材料 小麦幼苗

试剂、试剂盒 NH4+的培养液溴甲酚紫

仪器、耗材 培养皿扭力天平电炉pH计 量筒烧杯移液管玻棒镊子洗耳球吸水滤纸塑料薄膜琼脂

实验步骤

一、材料和设备

小麦幼苗,直径10 cm 的培养皿,扭力天平,电炉,pH计,50 ml 量筒,100  ml 烧杯,0.5  ml 移液管,玻棒,镊子,洗耳球,吸水滤纸,10×10cm 塑料薄膜,琼脂

50pp M 含NH4+的培养液:(1000  ml H2O+183 M g(NH4)2SO4+136 M gCaSO4)

0.6%溴甲酚紫:0.6克溴甲酚紫用少量95%酒精溶解后,用蒸馏水定溶至100  ml

0.01N NaOH,0.01N HCl

二、实验步骤

1.显色基质的准备:取50  ml 含50pp M  NH4+的培养液,加入0.5克琼脂和0.5  ml  0.6%的溴甲酚紫指示液,在电炉上搅拌加热至沸腾。然后冷至40℃左右时,用稀NaOH或稀HCl调pH至6.0(暗红色)。

2.显色:将琼脂-指示剂混合液倒入培养皿中,使之成为均一的薄层,冷却凝固后备用。取预先培养7-10天的小麦幼苗(根长10cm 左右)1株,用蒸馏水冲洗根系,于塑料薄膜(10×10cm )上展平,并用吸水纸吸干薄膜和根表的水分,反转贴于已凝固的琼脂-指示剂混合液上,轻压驱除气泡并使根系嵌入凝胶中。室温条件下1小时左右,pH指示剂即显颜色变化。

3.观察现象并解释结果:pH指示剂不同颜色指示出不同根际部位的pH值。观察根系周围琼脂-指示剂混合液的颜色变化,确定根系pH是上升还是下降,说明根系pH值变化的原因。本实际可用标准琼脂-指示剂作对照,确定各根区的pH值,还可用微电极进行精确测定。

注意事项

1.溴甲酚紫显色范围为pH5.2-6.8(黄-紫),适用于微酸性条件下使用;

甲酚红变色范围为pH7.2-8.8(黄-红),适用于碱性条件下使用。

2.塑料薄膜和根表的水分必须吸干,否则影响显色结果。


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