糜蛋白酶

2023.4.28

鉴别

取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中约含lmg的溶液,取0.05m置白色点滴板上,加N-乙酰-L-酪氨酸乙酯试液0.2ml,混匀后,显紫红色

制法要求

本品应从检疫合格的牛或猪胰中提取,所用动物的种属应明确,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》要求。本品为动物来源,工艺中应进行病毒的安全性控制。

性状

本品为白色或类白色结晶性粉末或无定型粉末。

检查

酸度取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为5.5~7.0。溶液的澄清度与颜色取本品,加水溶解并稀释制成每lml中含2mg的溶液,依法检查(通则0901第一法和通则0902第一法),溶液应澄清无色或几乎无色胰蛋白酶取本品,加水溶解并稀释制成每1m1中含16000单位的溶液,作为供试品溶液;取胰蛋白酶适量,加水溶解并稀释制成每1ml中含2500单位的溶液,作为对照溶液。取供试品溶液50l与对照溶液5μl,分别置白色点滴板上,各加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液0.2ml,放置后,供试品溶液应不呈现紫红色或呈色时间迟于胰蛋白酶对照溶液。干燥失重取本品约0.2g,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥4小时,减失重量不得过5.0%(通则0831)。炽灼残渣不得过2.5%(通则0841)。

效价测定

照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。底物溶液冰冻保存,但不得反复冻融。取N-乙酰-L酪氨酸乙酯23.7mg,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢钠溶液61.1ml,混合,pH值为7.0)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀供试品溶液取本品适量,精密称定,加0.0012mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含12~16糜蛋白酶单位的溶液。测定法取0.0012mol/L盐酸溶液0.2ml与底物溶液3.0ml,在25℃±0.5℃,于237nm的波长处测定并调节吸光度为0.200。再精密量取供试品溶液0.2ml,加底物溶液3.0ml,立即计时并摇匀,每隔30秒读取吸光度,共5分钟(重复一次),吸光度的变化率应恒定,恒定时间不得少于3分钟若变化率不能保持恒定,可用较低浓度另行测定。每30秒的吸光度变化率应控制在0.008~0.012,以吸光度为纵坐标,时间为横坐标,作图,取在3分钟内成直线部分的吸光度,按下式计算。A-A0.0075TW 式中P为每1mg廉蛋白酶的效价,单位A2为直线上开始的吸光度;A1为直线上终止的吸光度; T为A2至A1读数的时间,分钟;W为测定液中含供试品的量,mg;0.0075为在上述条件下,吸光度每分钟改变0.0075,即相当于1个糜蛋白酶单位