外泌体蛋白组学服务中外泌体提取方式介绍
外泌体作为机体天然信息传递的载体在细胞间通信中发挥着重要作用，其频繁穿梭于细胞之间，为细胞之间的通信提供了桥梁，成为疾病标志物、疾病机理、药物开发等研究的创新热点。由于蛋白质是外泌体的重要组成成分，研究发现外泌体蛋白不仅影响细胞的生理状态，而且还与多种疾病的发生与发展密切相关，分析外泌体蛋白组成有助于推动外泌体功能的研究，基于质谱的蛋白质组学的技术为外泌体蛋白组研究提供了技术保障。
研究外泌体蛋白组，主要包含三个步骤，①外泌体提取纯化和表征。②利用质谱的技术鉴定外泌体蛋白组成。③外泌体蛋白组数据分析。外泌体蛋白组的研究离不开对外泌体分离纯化，这也是关键的一个步骤，现对第一点进行总结。
外泌体蛋白组研究中目前常用的外泌体提取方法有：超高速离心、密度梯度离心、免疫亲和方法、尺寸排阻色谱法、聚合沉淀法等技术。不同的外泌体提取方法各有优越点，而外泌体蛋白组学研究中对外泌体的纯度要求高，不纯的外泌体会引入大量杂蛋白，掩盖囊泡蛋白的真实信号，进而导致检测到的蛋白数量少。华盈生物开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系，针对不同类型的样本分别采用专属的外泌体提取方法，如超速离心、尺寸排阻等。
一、外泌体提取——超速离心法
超速离心法是最常用的外泌体提取方法之一，该方法通过多次离心步骤来分离和纯化外泌体。首先，通过低速离心去除细胞碎片和大颗粒物质。然后，通过高速离心将外泌体沉淀。最后，用缓冲液重悬外泌体沉淀，得到纯净的外泌体样品。超速离心法提取的外泌体通常具有较高的纯度且操作简便，无需特殊试剂，且文献引用较多，是目前的外泌体领域的分离“金标准”。厦门大学一科研团队在外泌体专业刊物Journal of Extracellular Vesicles上发表文章，报道了基于纳米流式细胞仪的分析策略，对常见的外泌体提取策略进行外泌体纯度和富集效率的评估，并证实超速离心相对是分离纯度最好的外泌体提取方法。
二、外泌体提取——qEV尺寸排阻分离柱
qEV尺寸排阻分离柱是由新西兰IZON公司研发和生产的一种基于尺寸排阻法色谱法（Size Exclusion Chromatography, SEC）原理的外泌体分离-纯化技术。该技术具有简便、快速、容易标准化操作的特点，只需要15min就可以从多种类型样本中提取到完整的高纯度外泌体。并且相较于其他方法，qEV外泌体提取所提取的外泌体纯度更高、浓度更高、活性也更高，还可以重复使用，尤其适用于外泌体蛋白组研究。在缓冲液的作用下，较大粒径的囊泡（外泌体）流速快，在特定的阶段会被洗脱出来进入样品收集管，成为实验样品。此技术有效避免了超速离心和密度梯度离心等传统方法分离囊泡（外泌体）时，由于超高离心力与蔗糖溶液高粘性造成的HDL蛋白或囊泡的聚集污染，也避免了传统方法对于囊泡（外泌体）的膜结构的损伤，使其保留完整的生物活性，并且适用于多种类型样品的外泌体提取。有研究文献通过高分辨质谱分析，比较了SEC和UTC分离的血浆外泌体，发现相较于超离，SEC得到的外泌体蛋白鉴定数量更多，比超离UTC更适合进行血浆外泌体蛋白组学分析。
三、外泌体提取——EIQ3试剂盒法
经典的超速离心法（差速离心）、密度梯度离心法在外泌体提取过程中经常受到大型仪器的资源限制，并且操作复杂、耗时、外泌体得率也低。华盈生物自主研发的Exosome Isolation Q3（简称EIQ3）系列沉淀法外泌体提取试剂盒，不仅有效提高外泌体得率，同时经过技术改良，能够显著减少杂蛋白残留（如血清高丰度蛋白）。如果样本较少，推荐用试剂盒法做，该试剂盒可以实现血清、血浆、尿液、细胞上清等液质样本中外泌体的快速提取，为后期外泌体研究的数据稳定性和可靠性提供保障。
具体的研究需求，可以选择合适的外泌体提取方法来获得纯净的外泌体样品，如结合超速离心法或者尺寸排阻法进行外泌体提取从而开展外泌体蛋白组学研究。
