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常用免疫检验方法的影响因素及评价

2019.5.06

1、免疫浊度法(免疫透射比浊法、免疫散射比浊法):(1)带现象(由于抗原或抗体极度过剩,而无沉淀物形成。如抗体过量称为前带现象,如抗原过量称为后带现象)可使结果偏低,甚至假阴性结果;(2)血脂过高,可使结果假性偏高。
2、ELISA:(1)钩状效应(类似于后带现象,出现于双位点一步法中,当待测抗原浓度过高时分别与固相抗体和酶标抗体结合,不形成夹心复合物)可使结果偏低,甚至假阴性结果;(2)溶血、黄疸、脂血标本可干扰结果判断。
3、金免疫测定(斑点金免疫渗滤试验、斑点金免疫层析试验):(1)带现象可使结果偏低,甚至假阴性;(2)溶血、黄疸、脂血标本可干扰结果判断。
4、凝集法(直接凝集法、间接凝集法如胶乳凝集法):(1)IgG类抗体常出现不完全反应,出现假阴性;(2)电解质浓度与pH值可引起非特异性凝集,出现假阳性;(3)溶血、黄疸、脂血标本可干扰结果判断。
临床免疫学检验结果评价
1、抗核抗体:应用肼苯哒嗪、盐酸普鲁卡因酰胺、甲基多巴、醋氮酰胺、对氨基水杨酸、口服避孕药、保泰松、苯妥英钠、链霉素、磺胺类、四环素类、硫脲嘧啶、三甲恶唑二酮等可至假阳性。
2、铁蛋白:标本溶血可使结果偏高。
3、免疫球蛋白:应用免疫抑制剂可降低。
4、甲胎蛋白:妊娠6周时开始升高,12-15周可达高峰。婴儿至周岁末时接近成人水平。
5、癌胚抗原:妊娠前6个月含量增高。
6、前列腺特异性抗原:肛门检查、尿潴留、尿道内器械检查、腔内B超可一过性升高。
7、Ca15-3:标本被细菌污染造成假阳性。
激素类检验结果评价
评价激素类检验结果时应注意:(1)激素生成部位,作用部位及作用形式;(2)检验方法所检测的激素形式;(3)由于激素受生理因素影响明显,应予注意。(4)联合检验有助于临床诊断与疾病的鉴别。
1、总T3、T4与游离T3、T4:由甲状腺分泌。总T3、T4包括蛋白结合部分与游离部分(活性成分),各种原因引起血清甲状腺素结合球蛋白升高或降低时(如肝炎、妊娠、应用避孕药等可使其升高,而肾综、营养不良、应激、应用雄激素、糖皮质激素使其降低),TT3、TT4亦可相应改变,而FT3、FT4受其影响较小。以上指标均受抗甲抗药或甲状腺激素的影响。抗心律失常药物如乙胺碘呋酮等脱碘酶抑制剂可抑制T4脱碘为T3,而使TT4、FT4升高,TT3、FT3减少。
2、促甲状腺素:垂体前叶分泌。分泌存在昼夜节律,夜间10-11点时最高、上午10点时最低,可相差2-3倍。(1)增高:长期应用乙胺碘呋酮、大剂量无机碘及锂盐、缺碘地区居住;(2)降低:应用大剂量的糖皮质激素。
3、促卵泡生成素与促黄体生成素:垂体前叶分泌。生理变化大,结果分析时应多次测定,结合分析。在月经期两者变化同步。HCG过高可使两者结果偏高;应用雌激素、孕激素等可使两者结果偏低。
4、催乳素:垂体前叶分泌。生理状态下呈脉冲式波动,有昼夜变化节律,有随年龄增长而降低的趋势。
5、皮质醇:肾上腺束状带分泌。昼夜波动大,早上8点最高,午夜12点最低。测定值包含蛋白结合与游离(活性部分)两部分。受与皮质醇结合球蛋白和白蛋白结合率的影响,与游离皮质醇浓度不平行。妊娠、肥胖,应用吩噻嗪类、苯妥英钠、利血平、糖皮质激素可影响皮质醇水平及昼夜节律。
6、雌二醇:女性主要来源于卵巢滤泡、黄体及妊娠时的胎盘;男性来源于睾丸或睾酮代谢产物。有生理性波动,清晨高于下午,青春期差异更明显。测定值包括与性激素结合球蛋白、皮质类固醇蛋白结合部分与游离部分(活性部分),当甲亢、肝病时,肝脏合成的结合蛋白增高时,可使总浓度升高,而游离部分可能并无变化,当甲减、营养不良时,可减少结合蛋白的合成,出现相反的影响。(1)增高:应用促排卵药物、氯米芬、雌激素等;(2)降低:应用口服避孕药、GnRH类似物等。
7、睾酮:男性主要有睾丸间质细胞合成,女性主要为肾上腺皮质分泌或脱氢异雄酮代谢产物,其为卵巢分泌。有生理性波动,清晨高于下午,青春期差异更明显。测定值包括与性激素结合球蛋白结合部分与游离部分(活性部分),当甲亢、肝病时,肝脏合成的结合蛋白增高时,可使总浓度升高,而游离部分可能并无变化,当甲减、营养不良时,可减少结合蛋白的合成,出现相反的影响。
8、孕酮:女性为黄体或胎盘分泌;男性为肾上腺皮质分泌。有生理性波动,清晨高于下午,青春期差异更明显。测定值包括与性激素结合球蛋白、皮质类固醇蛋白结合部分与游离部分(活性部分),当甲亢、肝病时,肝脏合成的结合蛋白增高时,可使总浓度升高,而游离部分可能并无变化,当甲减、营养不良时,可减少结合蛋白的合成,出现相反的影响。
9、人绒毛膜促性腺激素β亚基:人绒毛膜促性腺激素为胎盘分泌。
10、胰岛素:胰岛β细胞分泌。体内包括游离(活性成分)和与蛋白结合的胰岛素,测定结果反映的是游离胰岛素。对于产生胰岛素抗体和使用外源性胰岛素治疗的患者测出的胰岛素不能反应其真实水平。高糖、高氨基酸、应用生长激素、胰高血糖素、磺脲类、α受体抗拮剂、β受体激动剂时可使胰岛素增高。
传染病病原学检验结果评价
评价此类检验结果时应注意:(1)感染的窗口期,在感染早期由于血清中未产生相应的抗体,或滴度很低由于检验方法的局限性检测不出。会延误诊断。(2)感染各阶段产生的抗体类型不同,不同疾病产生的抗体类型不同。必须根据检验的抗体的特异性与类型来评价检验结果,否则易误诊,一般IgM出现于现存或近期感染,IgG出现于现存或即往感染。(3)必要时应用分子生物学方法协助诊断。
1、甲型肝炎病毒抗体IgM:部分感染者抗-HAV-IgM应答缺失可检测不出。
2、乙型肝炎病毒血清标志物:仅能用于乙肝病毒感染与复制程度的判断,肝炎诊断需结合肝功能检验。由于有变异株的存在,乙型肝炎病毒表面抗原阴性不能排除感染,并可不表达e抗原,表现为e抗原与e抗体检测为阴性。
3、丙肝病毒抗体IgM:感染后4-8周可检出。
4、艾滋病病毒抗体:感染4-6周可检出。需经确证试验确证后方可诊断HIV感染。
5、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR):检测的为非特异性的抗心磷脂抗体,其滴度与临床症状密切相关。一期梅毒早期、晚期梅毒可为阴性。类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、急性感染、自身免疫性疾病、传染性肝炎、麻风、乙醚麻醉等可出现假阳性。
6、梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验:检测特异性抗体,治愈后仍可在机体内持续存在甚至终身。可用于梅毒的确证检查,但不适用于疗效观察。
7、肥达氏试验:"O"抗体出现早,消失快,半年左右转阴;"H"抗体出现迟,可持续阳性数年。仅"O"抗体上升,可能为感染早期,仅"H"抗体上升,可能为既往感染、预防接种、非特异性反应。(1)假阳性:接受过伤寒或副伤寒疫苗注射、感染布氏杆菌或流行性感冒时可出现鞭毛凝集价增高,而菌体凝集价较低;结核病、败血症、传染性肝炎、其它沙门氏菌感染时可出现高凝集价,呈现假阳性;(2)假阴性:营养不良、免疫功能缺陷的病人、免疫功能未完善的婴儿、早期使用大量抗生素的病人可出现假阴性。
8、结核杆菌抗体:检出表示结核感染并不一定患病。在感染4-8周后可检出。
9、肺炎支原体抗体IgM:感染一周后水平上升,3-4周达高峰。
10、弓形虫抗体:IgG出现于感染后1-2周,2个月可达高峰,维持数年;IgM感染1周后,2周达高峰,后低滴度维持可达一年。
11、巨细胞病毒抗体:IgG可在感染的慢性期可于感染后2周至数年内维持阳性。
12、风疹病毒抗体:IgG在感染2-3周后出现,半年内达高峰、可持续数年;IgM在感染后2周内出现,在1-2月内持续降低。
13、抗链球菌溶血素O抗体:感染后一周内可出现,4-6周达高峰,2个月后下降,可持续数月或年余。

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