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血球计数板如何使用

2023.3.22

(1)构造:血球计数板是一块特制的载玻片,它的上表面有4条下凹的槽,构成3个平台,中间的平台又被一短横槽隔为两半,每半边各有一个方格网,每个方格网上有9个大小相等的大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用,这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。

(2)规格:

一种是大方格内分为25中方格,每一中格又分为16小方格;另一种是大方格内分为16中方格,每一中方格又分为25小方格。但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图:


(3)使用方法

①取清洁干燥的血球计数板,加盖玻片盖住网格和两边的槽。

②将待测菌液充分摇匀后,用无菌吸管吸少许,由盖玻片边缘或槽内加入计数板,使其自行渗入计数室内,计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。

③在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数,上下调动细螺旋,以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体,只数两条边上的,其余两边不计数。即数上线就不数下线,数左边线就不数右边线。

④计数时,若使用刻度为25中方格×16小方格的计数板,计数四个角的4个中方格,及中央1个中方格的菌数(即80小方格);若使用刻度为16中方格×25小方格的计数板,就数四个角的4个中方格(即100小方格)内的菌数。每小方格中菌数以5-10个为宜,如菌液过浓可适当稀释。

⑤每个样品重复计数2-3次,取其平均值,按下式计算样品中的菌数。

刻度为25中方格×16小方格的计数板:

刻度为16中方格×25小方格的计数板:

 

⑥试验结束后要清洗和整理试验用具,特别注意血球计数板不能用试管刷蘸洗涤剂擦洗,正确的做法是浸泡和冲洗,洗后自行晾干或用吹风机吹干。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物,若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。


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