HLA-B27检测方法的分析与对比
王向东
江苏南通良春中医医院
随着网络及媒体的发展，强直性脊柱炎（AS）也越来越多地出现在我们的视野中。从一些著名的演艺明星，到一些普通的患者，都在经历着病痛的折磨。HLA-B27（人类白细胞抗原B27），是强直性脊柱炎（AS）实验室检查的重要指标，在强直性脊柱炎患者中阳性率高达90%。今天，我们从检验医学的角度谈一下，HLA-B27检测的方法学区别以及其临床意义。
HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因，表达在机体中所有有核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量。我们根据HLA的特点，可以进行血清学、细胞学和分子生物学的分型。根据它的表达特点，用于临床上的检测HLA-B27的常见方法包括微量淋巴细胞毒法（complement dependent cytotoxity , CDC）、双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）、磁珠酶联免疫分析法（IMS-ELISA）、流式细胞仪分析法（FCM）、聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR-SSP）以及实时荧光PCR（RT-PCR）法等，下面我们慢慢分析：
01微量淋巴细胞毒试验(CDC )
应用已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，在补体的参与下可以使携带与分型血清型相同抗原的淋巴细胞死亡，判定被检者HLA型别的一种方法。
优点：不需要特殊的仪器，易于操作，一般实验室都可开展。
缺点：影响因素比较多，如细胞纯度、补体的活性和差异、抗体的纯度和效价、HLA的高度多态性、细胞表面B27抗原分子表达数目及抗原交叉性、操作者的主观影响等，容易造成假阳性和假阴性的结果。
02酶联免疫吸附试验（ELISA）
应用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待测样本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，在终止液的作用下最终化为黄色，颜色的深浅和样本中的HLA-B27呈正相关。
优点：其结果与CDC检测符合率为99%，且不受感染因素影响，重复性好。
缺点：准确度相对偏低，容易误诊、漏诊。
03磁珠酶联免疫分析法（IMS-ELISA）
通过经HLA-B27抗体包被的磁珠分离全血中带有HLA-B27抗原的白细胞，同时以CD45-辣根过氧化物酶结合体来标示全血中的白细胞，最后经四甲基联苯胺显色而测定其结果。
优点：操作简便，反应时间短，对标本新鲜度要求不高（2-8°C静置一周内都可），需要样本量少，结果客观。
缺点：不适合大批量操作。
04流式细胞仪分析法（FCM）
利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞有一定的荧光强度，由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达的百分比，从而判断HLA-B27的阴阳性。
优点：全自动仪器检测，克服了人为误差，重复性高，结果判断准确，为目前最理想的方法；
缺点：仪器昂贵，成本较高，只适合较大医院应用，而且荧光易淬灭。与HLA-B7抗原有一定的交叉反应，容易出现假阳性。
05聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR-SSP）
通过设计基因序列特异的引物SSP，对待测DNA进行PCR扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物。
优点：标本不受时间限制，陈旧血、冷冻血也可用于DNA的提取；DNA可长期保存以供复核或送其他实验室验证；技术成熟，判断结果客观准确，特异性强，灵敏度高，稳定性好。
缺点：PCR-SSP检测的是HLA-B27的基因型，携带B27基因并不等于细胞表面一定有HLA-B27抗原的表达。检测HLA-B27抗原的表达即其表型，或许对临床更有意义。
06实时荧光PCR法（RT-PCR）
在PCR反应液加入荧光染料，该染料能与双链DNA特异性结合，通过实时检测反应体系荧光信号强度，达到检测PCR扩增产物的目的。
优点：直接检测HLA-B27抗原的编码基因，不会与HLA-B7产生交叉反应，能准确的作出判断。
缺点：和PCR-SSP的缺点一样，而且操作需要成本高，需要有专业的实验室及人员。
6种方法在敏感性、特异性方面的对比：
通过对HLA-B27的检测方法的分析，我们发现由于每种方法的特异性和敏感性的差异，有的方法学存在假阳性或假阴性的结果。每家医院检测的方法不一样，得到的结果也会不一样。和临床医生、病人在沟通的时候，我们也可以建议再用第三种方法检测，以确证结果的准确性。也希望在未来，有更快捷、便宜、方便、合适、准确的方法问世，为病人、临床服务！
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