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如何摸索慢病毒最佳MOI值？

2020.4.23

MOI （multiplicity of infection），即感染复数，指的是感染时病毒与细胞数量的比值。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。但对于某些病毒如AAV病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用TU、IU、病毒颗粒（viral particles, v.p）或基因组数量（vector genome,v.g.）来表示病毒数量。

慢病毒（Lentivirus）载体是基于HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）的单链RNA病毒载体，可感染分裂或非分裂细胞，并将外源基因有效地整合到宿主染色体上，且具有较低的免疫原性，被广泛应用于各种体外细胞实验中。

常见细胞MOI参考值（慢病毒）

慢病毒MOI值摸索步骤

实验前信息准备

目标细胞系培养条件及增殖速度

排除细胞支原体污染

查阅文献，获得目标细胞参考MOI值（如没有相关文献，则可首先设置较大梯度的MOI进行预实验）

MOI梯度设置

在查阅到的参考MOI值前后各设置2个梯度，每个梯度至少相差2倍，举例：查阅到某细胞系在文献中慢病毒MOI应用为10，则设置MOI梯度为2.5-5-10-20-40。

低于参考值

查阅到的MOI

高于参考值

（可视情况省略此设置）

2.5

根据公式计算所需添加的病毒量：

MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒体积（mL）/细胞个数

铺细胞

在96孔板中铺1×10⁴个细胞/孔，培养基定容至100μL/孔；

慢病毒感染

依据所计算出的病毒体积，逐个孔添加慢病毒，并于感染次日更换新鲜培养基。

（5）确定MOI范围

a．带荧光标签的慢病毒：观察荧光

感染后72小时后，于荧光显微镜下观察细胞状态和荧光情况，确定细胞状态较好且荧光数较多的孔，对应为较适宜的MOI值。

不带荧光标签的慢病毒：抗性筛选（puromycin/blasticidin等）

查阅相应抗性素在相应细胞株中的筛选浓度，于感染后72小时加入药物，培养3-5天，镜下观察，选取细胞存活率较高且细胞状态较好的孔，对应为较适宜的MOI值。

（6）缩小MOI范围进行二次摸索（附加步骤）

如需较为精确的MOI值，可在步骤（5）中确定的MOI范围内再设置MOI梯度，实验方法同步骤（3）—（5）。举例：

第一次实验确定的最佳MOI范围
5	10
第二次实验的MOI设置
6	7	8	9

慢病毒感染中的常见问题

（1）怎样提高慢病毒的感染效率？

细胞良好的生长状态是达到高感染效率的保证。必要时可在感染时加入助感染试剂ADV-HR来提高慢病毒的感染效率。

（2）助感染试剂ADV-HR的使用浓度和使用方法是什么？

助感染试剂ADV-HR能够显著提高慢病毒的感染效率，并呈现剂量和时间依赖效应。但较高浓度的ADV-HR具有细胞毒性，影响细胞状态和感染效率。我们建议您务必于目的细胞中进行ADV-HR浓度梯度预实验。我们在HEK293中的实验表明，当ADV-HR使用浓度小于等于1.0×10^-2mg/mL时，细胞状态良好。

（3）慢病毒感染后为什么细胞中出现大量黑点，并影响细胞生长？

在排除细菌及真菌污染后，细胞中的黑点通常为细胞碎片，导致细胞破碎的原因有很多，但在慢病毒感染后，细胞破碎通常有两个原因：a. 慢病毒使用量过多，或细胞数量过少；b. 支原体污染。

由于轻度的支原体污染并不影响细胞的生长和增殖，故支原体污染被许多实验室所忽略。但支原体易在病毒感染细胞后爆发，故会出现大量细胞碎片。我们建议在使用病毒制品时，应首先排除细胞、培养物及培养环境中的支原体污染，以节约您的宝贵时间。

（4）慢病毒应如何保存？

建议您于收货后第一时间分装，并将病毒储存于液氮或-80℃。切勿反复冻融！在未经冻融情况下，持续-80℃储存环境可质保6个月，超出该储存条件则需重新进行质控鉴定。

moi值

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