中药材黄曲霉素检测技术概述（二）
5. 高效液相色谱分析
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PriboFast KRC光化学衍生器 波长：254 nm
柱 温 ： 35 °C
HPLC配置；高效液相色谱仪带有荧光检测器；黄曲霉毒素专用色谱柱 C18 150 x 4.6 mm
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（二）酶联免疫法
特点
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优点 |
缺点 |
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灵敏度高、耗时较短、样本处理比较简单、对技术人员要求不高、检测成本低、可同时检测大批量样本。适用于大量样本快速定量筛查。 |
可能存在一定假阳性率（交叉反应率）。 |
Pribolab(普瑞邦)推出的PriboFastR黄曲霉毒素总量试剂盒具有较高的灵敏度和准确度，适用于大量样本的定量分析。
1. 方法原理
采用直接竞争酶联免疫法，在微孔板上预包被黄曲霉毒素抗原，加入样本（或黄曲霉毒素标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素特异抗体。样本或标准品溶液中的抗原与预包被在板孔上的抗原竞争结合酶标抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样品吸光值与其所含黄曲霉毒素总量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素总量的含量。
2. 设备和试剂配置：
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序号 |
品名 |
规格及参数 |
数量 |
用途 |
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1 |
PriboFastR黄曲霉毒素总量试剂盒 |
96T，灵敏度：0.1ppb 货号：EKT-011 |
一盒 |
定量分析检测 |
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2 |
PriboSpin离心小柱 |
25T |
一盒 |
净化样本 |
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3 |
酶标仪（酶联免疫检测仪） |
滤光片：450nm |
一台 |
配套各类色谱仪，霉菌毒素检测用 |
3. 样本前处理：中药材：粉碎、提取、离心，取上清液加入PriboSpin离心小柱进行净化。
为什么要用PriboSpin离心小柱？中药材的基质复杂，提取时样本液颜色较深，而且不容易去除。有机试剂提取净化方法繁琐，试剂挥发对环境及人体造成危害，且净化效果不稳定。用PriboSpin离心小柱，则只需提取液离心过柱，即可去除提取液中的杂质，方便快捷，净化效果好，且回收率可以达到85%以上。
4. 检测步骤
4.1 免疫反应30min；洗板5次；显色反应30min；终止反应，酶标仪读OD值。
5. 分析结果的表述
用酶标仪判读结果。
（三）免疫金标快速检测法
特点
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优点 |
缺点 |
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操作简单、费用低廉、耗时短、检测快速。适用于样本快速定性初步筛查 |
存在一定假阳性、数据不方便保存及分析。 |
Pribolab(普瑞邦)推出的PriboStripTM黄曲霉毒素总量免疫金标快速检测条特异性好，适用于检测样本量大；短时间出具检测结果并控制经费的情况，可以快速定性，初筛。
1. 方法原理
黄曲霉毒素总量快速检测条应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的黄曲霉毒素总量在酶标孔中与胶体金标记的特异性抗黄曲霉毒素单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上AF－BSA偶联物的结合。如果样本中黄曲霉素总含量大于0.5 ug/L，检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。
2. 设备和试剂配置
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序号 |
品名 |
规格及参数 |
数量 |
用途 |
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1 |
PriboStripTM黄曲霉毒素总量免疫金标快速检测条 |
25T 检测限：10ppb 货号：PR-011 |
一盒 |
定性分析检测 |
3. 分析步骤：中药材粉碎溶解后取上清液检测。吸取样品滴加到加样孔中，8-15分钟读取结果。在C线显色的情况下：T 线显色比C线深或一样深是阴性。T 线显色比C线浅，或无显色是阳性结果。
五、 温馨TIPS：
1. 中药中真菌生长繁殖的有利条件主要是适宜的温度与水分。如能将中药贮存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。
2. 从事真菌毒素科研及检测的人员，必须注意防护，如穿戴隔离衣帽，在进行真菌分离培养工作时，应戴口罩，并尽量防止孢子飞扬。
3. 操作台面如有漏溅，应立即用新配的5％次氯酸钠消毒。以5％次氯酸钠（NaOCl）处理时，黄曲霉毒素于数秒钟内即被破坏，故是常用的消毒剂。
4. 也有应用生物学方法解毒的报道，生物学方法成本低，收效大，可能是一种有前途的除毒措施。
鉴于霉菌毒素对人体的危害，提醒各位奋斗在抗毒一线的老师们一定要注意保护自身安全哦！
关于Pribolab®（普瑞邦）
Pribolab®（普瑞邦）是面向全球提供霉菌毒素检测解决方案的主要服务商之一，凭借强大的研发团队和专业的霉菌毒素检测技术的研究，为全球农业生产、食品加工与粮食、饲料工业等行业提供专业的霉菌毒素检测技术与产品服务，同时为社会提供食品、饲料及饮料等的霉菌毒素、食品成分等检测分析。
