提高质粒DNA的转化效率方法有哪些
1.
细胞生长状态和密度:
不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600
来控制。DH5α菌株的OD600
为0.5时,细胞密度在5×107
个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。
2.
质粒的质量和浓度:
用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态DNA(cccDNA)。转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时,转化效率就会降低。1ng的cccDNA即可使50μl
的感受态细胞达到饱和。一般情况下,DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%。
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