鸭肝炎病毒1型PCR检测试剂盒使用说明书

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鸭肝炎病毒1型PCR检测试剂盒使用说明书

2021.3.01

产品名称：11鸭肝炎病毒1型PCR检测试剂盒
英文名称：Duck Hepatitis Virus 1(DHV1)1RTPCR
编号：YS30941-R

需要自备的器材：
1．11鸭肝炎病毒1型PCR检测试剂盒仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
具有下列特点:
1.11鸭肝炎病毒1型PCR检测试剂盒反应时间最短为16分钟,是目前反应时间最短的鲎试剂。
2.不依赖凝固蛋白形成凝胶,抗干扰能力强,特别适用于生物制品(蛋白、疫苗等)的内毒素检测。
3.不需要特殊的检测仪器就能准确定量。
4.配套偶氮化染色剂,可以避开有色检品自身颜色对鲎实验的干扰。
组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
11鸭肝炎病毒1型PCR检测试剂盒技术特点：
1准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。
2高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速：整个检测流程只需3小时。
4简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。使用及效果:
在无内毒素试管中,加入100 uL细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液,或待测样品。再加入100 uL鲎试剂溶液,混匀,37ºC温育T1分钟。温育结束,加入100 uL显色基质溶液,混匀,37ºC温育T2分钟。温育结束,加入500 uL偶氮化试剂1溶液,混匀,加入500uL偶氮化试剂2溶液,混匀加入500 uL偶氮化试剂3溶液,混匀,静置5分钟,于545nm波长处读取吸光度值。
内毒素标准范围(EU/mL)为0.01-0.1,T1为60分钟,T2为6分钟；内毒素标准范围(EU/mL)为0.1-1,T1为10分钟,T2为6分钟。
运输及保存:
常温运输,4℃避光保存,有效期年。