为什么荧光效率增加会导致荧光波长增加
分子所处的外界环境，如温度、溶剂、pH、荧光熄灯灭剂等都会影响荧光效率，甚至影响分子结构及立体构象，从而影响荧光光谱和荧光强度。了解和利用这些因素的影响，可以提高荧光分析的灵敏度和选择性。 1、温度温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。在一般情况下，随着温度的升高，荧光物质溶液的荧光效率和荧光强度将降低。这是因为，当温度升高时，分子运动速度加快，分子间碰撞概率增加，使无辐射跃迁增加，从而降低了荧光效率。例如，荧光素钠的乙醇溶液，在0℃以下，温度每降低10℃，在荧光效率增加3％，在—80℃时，荧光效率φf为1。 2、溶剂同一物质在不同溶剂中，其荧光光谱的位置和强度都有差别。一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增大而长移，荧光强度也有增强。这是因为在极性溶剂中，π→π*跃迁需要的能量差ΔE小，而且跃迁概率增加，使紫外吸收和荧光波长均向长移，强度也增强。溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般式温度上升，溶剂粘度变小，因此温度上升荧光强度下降。 3、pH的影响当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响，这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同，在不同酸度中分子和离子间的平衡改变，因此荧光强度也有差异。在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式，也就有相应的pH范围，一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。苯胺在pH为7~12的溶液中主要以分子形式存在，由于—NH2为提高荧光效率的取代基，故苯胺分子会发生蓝色荧光。但在pH＜2和pH＞13的溶液中均以苯胺离子形式存在，故不能发射荧光。 4.荧光熄灭剂荧光熄灭又称荧光猝灭，是指荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。荧光熄灭剂可以促进这种现象的发生。 5.散射光散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光，因其波长与荧光波长接近，对荧光测定的干扰更大，必须采取措施消除。
