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植物细胞结构与植物徒手切片观察试验

2019.11.12

实验方法原理

	1. 了解植物细胞形态的多样性；简易染色技术。 2. 掌握植物细胞的结构和植物徒手切片技术。 3. 识别和鉴定植物细胞中常见的后含物。
实验材料	洋葱青辣椒红辣椒马铃薯块茎鸭跖草菠菜叶山楂番茄麦粒蓖麻扁豆花苹果种子根
试剂、试剂盒	甲基蓝碱性紫间苯三酚酒精氢氟酸蒸馏水
仪器、耗材	显微镜解剖镜刀片载玻片盖玻片镊子吸水纸培养皿表面皿染色碟吸管酒精灯纱布绸布毛笔刷
实验步骤	一、植物细胞结构 1. 植物细胞形态的观察（1）清洗玻片将盖玻片、载玻片用水清洗干净，用纱布擦干。（2）取材将载玻片平放在实验台上，在其中央加一滴蒸馏水，用镊子或吸管取植物组织离析材料放在蒸馏水中。（3）加盖玻片把盖玻片的一边先与载玻片的水滴边沿接触，再慢慢的放下另一边，将盖玻片下的空气挤出，以免产生气泡。（4）在显微镜下观察，可见各形状的细胞。 2. 细胞壁、细胞核、细胞质和液泡的观察将洋葱鳞片状叶（或大葱鳞片状叶）纵向切一窄条（宽0.5 cm），然后用刀片在鳞片叶内表皮处与窄条垂直的方向轻切两刀（划破表皮即可），两刀距离0.5 cm左右。用镊子将两切缝间的一块表皮轻轻撕下来。装片时先在洁净的载玻片上放一滴清水，再放洋葱表皮，盖上盖玻片。在低倍镜下观察，即可看到许多无色透明的长行细胞，在细胞中的细胞质内有一个圆形的细胞核。将装片从显微镜上拿下，加碘液染色。用高倍镜观察，可以看到细胞壁和染成黄褐色的细胞核、染成淡黄色的细胞质及细胞质里的液泡。 3. 线粒体的观察撕取鸭跖草叶或大葱叶的内表皮一小块，置于载玻片上，加一滴0.25 ％碱性紫，1—2分钟后冲洗除去染色剂，加水制片在高倍显微镜下观察，可见到一些微小的颗粒被染成紫色，这些颗粒具有布朗运动，这些颗粒就是线粒体。 4. 植物细胞内的质体观察（1）叶绿体取葫芦藓拟茎叶体或黑藻放在载玻片上，用刀刮下一小部分叶片，制成装片，在低倍显微镜下观察，可看出葫芦藓的叶片形状是近长方形，每个细胞内含有许多颗粒状的叶绿体。换高倍镜放大观察，可清楚地看到其细胞内的叶绿体是圆饼状。（2）白色体取紫鸭跖草较幼嫩的叶，沿叶脉处撕取表皮，制片观察，可见许多粒状的白色体，分布在细胞核的周围。（3）有色体取成熟的番茄（或红辣椒）果实，用针从果皮下挑取一小块果肉制成压片，用高倍镜观察，可以看到在它们的果肉薄壁细胞的细胞质中具有橙红色的有色体。 5. 植物细胞的内含物观察（1）淀粉粒取马铃薯块茎做徒手切片，先在低倍镜下观察，可见到其薄壁细胞中含有许多白色的颗粒即淀粉粒。换高倍镜观察，可以看到淀粉粒的轮纹，并可找到具有两个脐的淀粉粒。（2）贮藏蛋白质取蓖麻种子，剥去种皮，用肥厚的胚乳做徒手切片。先把切片放入盛有纯酒精的培养皿中洗涤数分钟，使切片中的脂肪溶解在酒精中。然后将切片取出制成装片，在高倍镜下观察，可以看到胚乳细胞内的糊粉粒，它是由贮藏在液泡中的蛋白晶体、球蛋白体和充填的无定形的胶质共同组成的。如在切片上加一滴碘-碘化钾试剂，其蛋白质呈黄色。（3）油滴取蓖麻胚乳做徒手切片，并用苏丹III溶液染色，在低倍镜下观察，可看见在细胞内有被染成红色的油滴（脂肪滴）。（4）结晶体取秋海棠叶柄（或天竺葵茎）做横切徒手切片，在显微镜下观察，可见其基本组织细胞中常有单晶体或晶簇。（5）花青素将扁豆花瓣平铺在载玻片上，用刀片刮去下表皮和部分薄壁组织，将剩下的部分装片，在显微镜下观察，可见其薄壁细胞内的细胞液呈红色，这就是细胞液中的花青素显现的颜色。 6. 胞间连丝的观察用刀片沿新鲜的经辣椒的果皮表面平行方向，切取一薄片（或把辣椒的果皮里面朝上平放桌面上，用快刀刮去肥厚物质，使之很薄），加碘液染色制片观察.在高倍镜下，可以看见其表皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹孔），孔里有细胞质穿过。 7. 细胞壁的变化（1）细胞壁木质化取蚕豆等草本植物的老茎做横切徒手切片，放载玻片上，先加一滴盐酸浸透细胞，稍等2—3分钟，除去多余的盐酸，再加一滴间苯三苯酚溶液（50%的酒精溶液），最后加盖玻片，在显微镜下观察。可见有些厚壁细胞群的细胞壁着红色，这是在酸性环境中木质素与间苯三酚起的红色反应。（2）细胞壁角质化取蚕豆、番茄或向日葵做横切徒手切片。加一滴苏丹Ⅲ酒精试剂，染色制片镜检观察。可见到茎的最外层表皮细胞的外侧壁着橘红色。这是茎表皮细胞外壁所沉积的角质素（脂肪类物质）与苏丹Ⅲ反应的结果。（3）细胞壁栓质化取土豆块茎切成1 cm左右厚度的长方块，然后沿长方块的短径表面做徒手横切切片，用苏丹Ⅲ酒精染色制片，镜检观察。可见其表面几层细胞的细胞壁着橘红色，这就是细胞壁栓质素与苏丹Ⅲ反应的结果。二、植物徒手切片 1. 选材一般选择发育正常、软硬适中的植物器官或组织为材料。所取的新鲜材料应及时放入水中，以免徒手切片时萎蔫。材料太硬时，可用1.5 ％的氢氟酸或用甘油和70%酒精的等量混合液进行软化处理；材料太软时，可用马铃薯块茎、胡萝卜肉根等作支持物，把材料夹在其中进行切片。对有些植物的叶片可卷成筒状进行切片或用三片双面刀片制成简易的“切刀”进行切片。取材的大小，一般直径不超过5 mm，长度以15-25 mm为宜。 2. 切片（1）先把欲切的材料用刀片削成大小适宜的段块，并将切面削平，然后将材料和刀片蘸水湿润（以后每切一片都要用水湿润）。（2）用左手的拇指、食指和中指夹住材料。为防止切片时割伤手指，应使材料上端（切面）略高于食指，拇指略低于食指。用右手的拇指和食指捏住刀片一端，置于右手食指之上，刀片与材料切面平行，刀刃放在材料左前方稍低于材料断面的位置。（3）以均匀的力量和平稳的动作使刀刃自左前方向右后方斜滑拉切，注意不要直切，中途不停顿，拉切速度要快，不要推前拖后（拉锯式）切割，左手食指向下稍微移动，使材料略有上升，从而调动每张切片的厚度。切片过程中右手不动，只是右臂移动，动作用臂力而不用腕力。（4）切片要薄、平而完整，将切下的切片用毛笔刷蘸水从刀片上轻轻移入培养皿的清水中或直接将刀片浸没于水中使切片漂洗下来。 3. 临时装片制作。在洁净的载玻片中央滴一滴清水，用镊子在培养皿中挑选薄而透明、完整的切片放在水滴中，取干净盖片自水滴左侧慢慢斜着盖下，以免气泡产生，这样就做成了临时装片。