细胞和细胞内含物的观察-2
（3）洋葱鳞片表皮细胞线粒体的活体染色：取一载玻片，在其中央加一滴0.5%詹纳斯绿染液。用镊子从洋葱鳞片的内表面撕下一小块表皮，放在载玻片上的染料中，并使其展开，染5—10分钟，用吸管吸取蒸馏水，滴于染色的载玻片上，使染液冲淡，最后使标本周围液体近于无色。此时，用镊子取一盖玻片，先将它的一边轻轻接触到载玻片染液的边缘。此时再慢慢地放下盖玻片，这样可以避免出现气泡。如载玻片上水过多，可用一吸水纸从盖玻片的一侧吸去过多的染液。此时，可放在显微镜下进行观察。
先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注意细胞核位于细胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。
3．电镜照片的观察
观察了光学显微镜的线粒体以后，在观察线粒体的电镜照片。在电镜照片上，可以看到，线粒体不是一个简单的杆状或颗粒状，从切面看它是一个具有双层膜的小囊：外膜完整、内膜连续不断地向线粒体的基质褶入，形成一些列双膜的嵴（cristae）. 嵴的形状和数目随细胞不同而异。可以说线粒体是一个复杂的膜系统。
（二）高尔基体
本实验所用标本是按Aoyama镀银法制作的，简单地讲。在制作中，首先将材料放于含有氯化（）和福尔马林的固定剂中，进行固定，然后镀银，若干小时后，取出放入还原液。最后，经脱水、包埋、切片，制成薄切标本。用这种方法制成的标本，在细胞内的高尔基体被显示为棕黑色（详细方法见本实验末附录）。
1．高尔基体永久制片的观察。在兔神经节细胞核的周围原生质中，可看到棕黑色的网状物，此即为高尔基体。
2．高尔基体电镜照片的观察
在观察了光学显微镜下的高尔基体后，在观察示范电镜照片，注意高尔基体是由几部分组成的。
（三）叶绿体
叶绿体—示范：叶片横切面上，在叶肉细胞质部位有许多圆形颗粒，此即叶绿体。
此种材料，亦可取新鲜叶片，用刀片做徒手切片或用镊子撕下菠菜叶肉细胞将切片放于载玻片上，滴一滴蒸馏水，加上盖玻片，即可在显微镜下直接观察绿色的叶绿体。
在电镜下，叶绿体和线粒体一样，也显示为一个复杂的膜系统，对照电镜照片你能说出叶绿体的超微结构吗？
（四）细胞内含物
1．多糖：观察小鼠肝细胞的永久制片，肝细胞内储存有大量的肝糖，可以用PAS反应显示肝糖在细胞内存在的部位。
2．脂滴：取花生的子叶，用徒手切片法，切成薄片，放于载玻片上，加一滴苏丹3染液染色5分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖玻片，即可进行观察，观察时注意脂滴的颜色及其在细胞内的分布。
3．淀粉：取一块马铃薯，用徒手切片法，切成薄片，将薄片放于载玻片上的水滴中，加盖玻片后即可观察，先观察一下淀粉粒的形状及在细胞内的分布，然后在加碘液染色5分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖片观察。
附录：线粒体及高尔基体永久标本的制作
（一）显示线粒体—Regand染色法
1．取材固定：固定材料必须新鲜，所以要求杀死动物后立即取材，切成1—2mm3大小的块，投入固定液中。
固定液：
3%重铬酸钾20ml
福尔马林（中性）5ml
固定4天（可在冰箱中），每天换固定液一次。4天后转入3%重铬酸钾中7天，每2天换一次液体。
2．流水冲洗24小时后，脱水、透明、包埋、切片等过程均按常规。
3．染色
（1）切片脱蜡到水（按常规）；
（2）媒染：用5%铁明矾溶液，在35℃内放24小时后用蒸馏水洗；
（3）染色：苏木精液染24小时；
（4）分色：用5%铁明矾进行分色，此步要在显微镜下进行，边分色，边检查，直至适合为止；
（5）水洗；
（6）脱水——封片（按常规）；
（7）镜检：线粒体被染成蓝黑色。
（二）显示高尔基体—DaFano氏硝酸钴镀银法
1．溶液的配制
（1）硝酸钴溶液：
硝酸钴1g
中性福尔马林15ml
蒸馏水35ml
（或用乙醇或甲醇30ml，中性福尔马林15—20ml，水80ml配制）
（2）硝酸银溶液：
硝酸银1.5g
蒸馏水 100m
（3）还原剂：
对苯二酚1—2g
中性福尔马林15ml
亚硫酸钠0.1—0.5g
蒸馏水100ml
2．镀银步骤
（1）固定：在硝酸钴溶液中固定10—24小时，但不宜超过24小时；
（2）蒸馏水快洗；
（3）室温下在硝酸银溶液中放置36—48小时；
（4）蒸馏水冲洗；
（5）还原剂中还原，8—24小时；
（6）蒸馏水洗，快步脱水，透明，包埋；
（7）切片—帖片—脱蜡到水—封片；
（8）镜检，高尔基体呈黑色，细胞质呈黄色。
