UF-100尿液分析仪筛检尿路感染临床意义的探讨
目的：探讨UF-100尿液分析仪筛检尿路感染的临床意义。
方法：对UF-100作重复性试验，用UF-100检测325份尿中细菌和白细胞，同时作定量细菌培养并将结果作比较。用Yerushalmy模式评价2种方法的一致性及UF-100筛检的灵敏度、特异性等。
结果：重复试验中，UF-100细菌计数CV值低于细胞计数CV，与定量细菌培养结果比较，细菌计数的筛检灵敏度为80.0%，特异性为50.4%，阳性预计值为28.7%，阴性预计值为91.0%，假阳性率为39.7%，假阴性率为4.0%，准确率为56.3%。
结论：UF-100具有良好的分析尿液的性能，在临床尿路感染筛检时可用细菌一项指标，90%结果阴性的标本可在短时间内筛去，大大减少实验人员繁复劳动，降低检验成本，但应注意假阴性，更不可替代尿定量细菌培养。
关键词：尿路感染；UF-100尿液分析仪；定量细菌培养；筛检
尿路感染是指病原体引起肾脏、输尿管、膀胱、尿道不同程度的感染，其实验室诊断主要依赖尿定量细菌培养。一份尿标本从采集、检查到获取报告需要3d，且80%的送检尿标本培养结果为阴性，造成人力和物力资源的严重浪费。目前急需一种可靠的省时省力的筛检方法，筛去大多数细菌培养结果预计为阴性的标本，将结果可能为阳性的标本进一步作为定量细菌培养。
日本Sysmex公司生产的UF-100全自动尿液分析仪（以下简称UF-100）结合流式细胞技术与电阻抗测定法，通过测定前向散射光、荧光的波幅和强度以及电阻的变化报告12种参数，对尿5种有形成分（红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、细菌）进行分析。为了解UF-100对尿中细菌及白细胞的分析性能，对UF-100用于尿路感染筛检的临床可能进行探讨，我们对UF-100计数细菌、白细胞作了重复性试验，对325份疑似尿路感染标本进行UF-100检测和定量细菌培养，并将结果作比较。
材料和方法
一、尿标本来源
325份尿标本来自瑞金医院临床微生物科和第六人民医院检验科细菌室。医务人员严格按照中段尿采集指南操作，取可疑患者清洁中段尿10ml置带盖的无菌试管中，立即送检。
二、仪器和材料
UF-100全自动尿液分析仪及配套试剂（包括质控品）为日本Sysmex公司产品。血平板与麦康凯平板由上海伊华医学科技有限公司提供。1μl定量接种环为英为Oxoid公司产品。MicroScan Walk-Away 40及配套细菌鉴定板条为美国Dade公司产品。细菌鉴定仪（VITEK-60、VITEK-2）及配套细菌鉴定板条为法国生物-梅里埃公司产品。
三、方法
1．定量细菌培养和菌种鉴定
收到尿标本后，立即用1μl定量接种环取充分混匀的尿液1环分别接种血平板和麦康凯平板，放（35±1）℃温箱内孵育18～24h，取出作菌落计数。凡革兰阴性菌>105cfu/ml、革兰阳性菌>104cfu/ml为尿定量细菌培养结果阳性，并对这些菌株进一步鉴定到种。
2．UF-100使用方法
工作前先作仪器的每日质控，数据正常时开始检测。将进样针插入含充分混匀样品的试管，按进样开头，仪器自动吸取800μl样品，分析各种参数，记录分析数据。
3．UF-100测定细菌的精密度评价
取新鲜尿标本5份，各取10 ml加入无菌试管，每份尿标本重复测10次，记录数据，求均数（ ）与变异系数（CV）。
4．临床尿标本检测
将接种培养基后的尿液置4℃冰箱保存并于当日（采集后10h内）用UF-100尿液分析仪检测。记录细菌和白细胞的分析参数，以细菌≥2750/μl，白细胞≥20/μl作为尿路感染的阳性参考值。所测结果与尿定量细菌培养结果比较，用Yerushalmy模式评价UF-100对尿路感染筛检的敏感性、特异性、阳性/阴性预计值、假阳性/假阴性率和准确率。
结果
一、 用UF-100对细菌、白细胞计数精密度评价结果，见表1。
表1 UF-100计数细菌、白细胞重复性评价
标本 | 重复次数 | 细菌 | 白细胞 | ||
CV （%） | CV （%） | ||||
1 | 10 | 566.68 | 3.51 | 1.39 | 35.48 |
2 | 10 | 707.04 | 4.45 | 6.79 | 12.92 |
3 | 10 | 1093.1 | 2.15 | 3.12 | 12.44 |
4 | 10 | 1445.1 | 2.75 | 15.56 | 8.94 |
5 | 10 | 1674.8 | 4.12 | 5.28 | 19.27 |
二、 尿定量细菌培养结果
325份尿标本中，培养结果阴性共65份，阳性率为20.0%；共分离出73株菌，其中革兰阳性细菌24株（32.8%），革兰阴性细菌39株（53.4%），真菌10株（13.7%），见表2。
表2 325份尿标本病原菌的分离与鉴定
菌株名称 | 数量 | 分离率（ % ） |
G - 杆菌 | 39 | 53.4 |
大肠埃希菌 | 27 | 37.0 |
肺炎克雷伯菌 | 4 | 5.5 |
奇异变形杆菌 | 2 | 2.7 |
鲍曼不动杆菌 | 2 | 2.7 |
铜绿假单胞菌 | 2 | 2.7 |
阴沟肠杆菌 | 1 | 1.4 |
荧光假单胞菌 | 1 | 1.4 |
G ＋ 球菌 | 24 | 32.8 |
粪肠球菌 | 8 | 11.0 |
屎肠球菌 | 8 | 11.0 |
粪链球菌 | 3 | 4.1 |
表面葡萄球菌 | 2 | 2.7 |
金黄色葡萄球菌 | 1 | 1.4 |
溶血性葡萄球菌 | 1 | 1.4 |
无乳链球菌 | 1 | 1.4 |
真菌 | 10 | 13.7 |
二、 UF-100筛检尿路感染的评价，见表3。
表3 UF-100细菌计数结果与定量细菌培养结果的比较
细菌培养 | UF-100 检测 | |||
细菌 | 细菌和白细胞 | |||
+ | - | + | - | |
+ | 52 | 13 | 43 | 22 |
- | 129 | 131 | 65 | 195 |
按表3内容采用Yerushalmy模式计算，该方法的灵敏度、特异性、阳性/阴性预计值、假阳性/假阴性率、准确率见表4。
表4 UF-100 2种检测指标筛检性能的评价（%）
指标 | 灵敏度 | 特异性 | 阳性 预计值 | 阴性 预计值 | 假阳性率 | 假阴性率 | 准确率 |
细菌 | 80.0 | 50.4 | 28.7 | 91.0 | 39.7 | 4.0 | 56.3 |
细菌和白细胞 | 66.2 | 75.0 | 39.8 | 89.9 | 20.0 | 6.8 | 73.2 |
讨论
UF-100全自动尿液分析仪是通过流式细胞术及电阻抗测定原理对尿有形成分作分析的，有流体动力、光学、电子等多个系统。吸入800μl尿液后自动加以稀释和混合，并对细胞、细菌等有形成分作特异性染色，通过加压使细胞进入充满鞘液的流室。在鞘液的约束下，细胞排成单列，经流室喷嘴喷出，形成的细胞柱与激光束垂直相交，使激活的细胞产生荧光。流式细胞入口两端电极间的恒定直流电使有形成分通过时产生与细胞大小呈正比的电阻变化。通过测定前向散射光、荧光的波幅和强度及电阻抗的变化报告12个参数，对细菌、白细胞等5种有形成分进行分析。UF-100的重复性试验结果表明，仪器具有良好的测试重复性，计数细菌的精密度好于白细胞。这种良好的分析尿中细菌的性能使筛检尿路感染成为可能。
长期以来，尿定量细菌培养一直是尿路感染实验室诊断的确诊方法。按照尿中革兰阳性菌>104cfu/ml或革兰阴性菌>105cfu/ml时诊断为尿路感染的标准，在325份标本中有65份检出病原菌，阳性检出率为20.0%。分离出73株菌，其中39株为革兰阴性菌，占53.4，以大肠埃希菌多见（27/39），这些结果与国外文献报道接近。鉴于尿定量细菌培养可得到患病的直接证据，在本研究中作为金标准。
本研究将细菌≥2750/μl、白细胞≥20/μl作为尿路感染的阳性参考值（与国外学者相同），采用细菌计数单一指标时出现13份假阴性结果。分析其病原体时发现有3份粪链球菌、3份屎肠球菌、3份真菌、4份大肠杆菌。这些细菌，在国外学者同类研究假阴性标本中也有发现。尿中病原菌在种种因素影响下，体积增大或聚集成簇时，均可被仪器误作其他颗粒而使结果呈“阴性”，造成漏检。增加白细胞计数指标，虽可大大增加真阴性例数，但假阴性结果更多，筛检时可只采用细菌计数这一指标。
与260份细菌培养阴性结果相比，UF-100计数细菌出现129份假阳性。这可能是患者采样前已服用一定量的抗生素，用一般方法培养不出细菌或UF-100检测时将尿中其他颗粒误作细菌之故。
以定量细菌培养结果为金标准，将细菌计数结果与之比较，UF-100筛检灵敏度为80.0%，特异性50.4%，阳性预计值为28.7%，阴性预计值为91.0%，假阳性率为39.7%，假阴性率为4.0%，准确率为56.3%，表明该法在临床使用时有4.0%的假阴性结果，存在漏诊的可能性；检测时可筛除90%结果为阴性的标本，减少实验人员繁复的劳动并降低检验成本。若增加白细胞计数指标，可提高筛检的特异性和准确率。
UF-100操作简便、快速，仅需70s便可生成打印的检验报告，每小时能完成100份标本检测，可使临床医生在第一时间段获得尿液检查的有关信息，UF-100检测有假阴性结果，虽可用于临床尿路感染的筛检，但不可替代定量细菌培养。
