输血前免疫血液学检查之疑难配血（一）
<血液标本的采集及准备
1. 输血申请单：必须含有病人姓名、身份号、住院号、床号及负责医师的签名。还应包含申请日期、用血原因及时间、用血种类及数量；病人出生年月、性别、种族、疾病诊断、输血史、妊娠史、输血反应史、有无不规则抗体及血型等。
2. 受血者血样：
① 认真核对后，方可采集；
② 血液标本必须收集到有正确标记的带塞子的试管里，且标明病人姓名、住院号、采集日期及采集者；
③ 血液标本应是不抗凝血，以避免纤维蛋白、抗凝剂成分对血清学试验的干扰；
④ 溶血或混入静脉输注液体而致标本稀释的血液标本不得使用；
⑤ 须用输血前3天以内采集的血液标本；
⑥ 输血后，病人的血液标本须在1～4℃至少保存7天，以备重复试验。
3. 献血员血样：
① 从血袋上附着的血样小辫获得献血员血液标本；
② 在标本收集管上粘贴血袋上有关血液制品号的条形码标签；
③ 准确核对血袋上及标本管上的号码。
血清学试验
一、受血者试验
（一）血型鉴定
1. ABO血型鉴定：
⑴ 常规鉴定：
① 正定型：用抗－A抗－B试剂检测受血者红细胞。
② 反定型：用A和B型试剂红细胞检测血清中的抗体。
人ABO血型是由红细胞的抗原和血浆／血清中的抗体所决定，因此正反定型的结果应该一致。
表1 常规ABO正反定型试验
| 正定型 | 反定型 | 血型 | ||
| 抗－A | 抗－B | A | B | |
| O | 0 | + | + | 0 |
| ＋ | 0 | 0 | + | A |
| 0 | ＋ | + | 0 | B |
| ＋ | ＋ | 0 | 0 | AB |
⑵ 如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在正定型试验中增加抗－A1、抗－AB及抗－H，反定型试验中增加A2、O及自身红细胞。
表2 疑难ABO正反定型试验
| 正定型 | 反定型 | 自身对照 |
| 抗-A 抗-B 抗-AB 抗-A 抗-H | A1 A2 B O |
正定型试验中的抗－AB是用来确认弱A和弱B抗原，抗－A1用于鉴定A亚型，抗－H用于鉴定亚型及孟买型。反定型试验中的A2细胞是用于鉴定A2亚型。O细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影响定型，自身对照用于是否存在自身抗体影响定型，如果与O细胞或自身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一步进行血型鉴定。
⑶ 如果无法找到正反定型不一致的原因，则只能给病人输注O型红细胞，病人血型可请血液中心血型参比试验室协助鉴定。
⑷ ABO定型不一致的原因：
Ⅰ、反定型试验出现弱反应或缺失抗体：
新生儿；
老人；
低球蛋白症的白血病人或淋巴瘤病人（恶性）；
使用免疫抑制剂而致低球蛋白的病人；
先天丙球缺乏的病人；
免疫缺陷者；
骨髓移植病人；
双胞胎嵌合体。
Ⅱ、弱反应或缺失抗原：
A亚型、B亚型或AB亚型；
白血病导致A或B抗原减弱，何杰金病有时会抑制抗原表达，与白血病类似；
某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗－A或抗－B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性；洗涤红细胞可解决此问题；
获得性B；
抗－A或抗－B试剂中存在低频抗原的抗体。
Ⅲ、蛋白或血浆不正常引起的正反定型不符：
某些疾病导致球蛋白水平增高引起缗钱状凝集，纤维蛋白原水平的增高也会引起缗钱状凝集，导致假阳性凝集；
血浆增溶剂（葡聚糖、PVP）也会引起缗钱状凝集。
Ⅳ、其他原因引起的正反定型不符：
多凝集：当病人感染细菌或病毒后，病毒或细菌产生的酶使红细胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗－T抗体，因此可与正常人血清产生凝集反应，正定型试验假阳性；
冷自身抗体引起的自家凝集反应，正反定型均可出现假阳性；
存在ABO系统的意外抗体，如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗－A1，导致反定型试验多出抗体；
被检者血清中存在ABO系统以外的同种抗体，反定型时出现假阳性反应；
非抗－A及抗－B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集，如抗－B的染料吖啶黄。
2. Rh（D）血型鉴定：
⑴ Rh(D)抗原检测原则：
① 对受血者常规一般只测Rh(D)抗原，而对献血员不仅要检查Rh(D)抗原，并在其为阴性的前提下必须进一步确定是否为弱Rh(D)（即D U）。
② Rh(D)阴性及弱D的受血者只能提供Rh(D)阴性血，不得使用D阳性及弱D的血。即弱D针对受血者而言为D阴性，而对于供血者而言则为D阳性。
③ 对直接抗人球蛋白试验阳性的Rh(D)阴性红细胞进行Rh(D)定型时，易引起假阳性反应，因此必须按照试剂生产商的试剂使用说明书要求，增加对照试验。
⑵ Rh（D）抗原检测方法：
① 试管法；
② 微柱凝胶法。
（二）、不规则抗体的检测和鉴定：
1. 血型不规则抗体检测：必须对有输血史、妊娠史或短期内需要接受多次输血者及交叉配血不合者进行抗体筛选试验。
⑴ 抗体筛选的重要性：有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，并可以在配血前鉴定此意外抗体，获得充足的时间来选择缺少相应抗原的相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。
⑵ 抗体筛选用试剂红细胞：
① 试剂红细胞必须含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb
② 目前已商品化的试剂红细胞有两种，分别为双人份细胞和三人份细胞组。
两组细胞抗原分布图
| Rh-Hr | Kell | Duffy | Kidd | Lewis | P | MN | Lutheran | Xg | ||
| donor | D C c E e | K k | Fya Fyb | Jka Jkb | Lea Leb | P1 | M N S s | Lua Lub | Xga | |
| Ⅰ | R1R1 | + + 0 0 + | + + | + 0 | ＋＋ | 0 + | 0 | + + ++ | 0 + | ＋ |
| Ⅱ | R2R2 | + 0 + + 0 | 0 + | ＋＋ | ＋0 | + 0 | ＋ | + 0 ++ | + + | 0 |
三组细胞抗原分布图
| Rh-Hr | Kell | Duffy | Kidd | Lewis | P | MN | Lutheran | Xg | ||
| donor | D C c E e | K k | Fya Fyb | Jka Jkb | Lea Leb | P1 | MNSs | Lua Lub | Xga | |
| 1 | R1R1 | + + 0 0 + | + + | + 0 | 0 + | 0 + | ＋ | +++0 | 0 + | 0 |
| 2 | R2R2 | + 0 + + 0 | 0 + | + + | + + | + 0 | ＋ | 0+0+ | 0 + | + |
| 3 | rr | 0 0 + 0 + | 0 + | 0 + | + 0 | + 0 | ＋ | +00+ | 0 + | + |
③ 试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。
