血脂分析的方法学与临床应用新进展(2)
三、 血脂测定的方法学
(一)、测定方法
1.血清TC测定：化学抽提法—ALBK法为目前国际上通用的参考方法。卫生部北京老年医学研究所生化室建立的高效液相色谱(HPLC)法也推荐作为我国TC测定的参考方法。 建议酶法[如胆固醇氧化酶- 过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(CHOD-PAP法)](以胆固醇酯酶水解血清中的胆固醇酯，同时以胆固醇氧化酶将胆固醇氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，终点产物的测定应用最广的是Trinder显色反应系统，试剂含过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚。)作为临床实验室测定血清TC的常规方法。
2.血清TG测定：目前尚无公认的TG测定的参考方法，二氯甲烷-硅酸-变色酸法是美国疾病预防与控制中心(CDC)测定TG采用的参考方法。卫生部北京老年医学研究所建立的HPLC 测定总甘油和游离甘油的方法拟推荐为我国TG测定的参考方法。
建议酶法[如甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(GPO-PAP 法)]作为临床实验室测定血清TG的常规方法。一般临床实验室可采用一步GPO-PAP法，有条件的实验室(如三级以上医院)应考虑开展游离甘油的测定或采用两步酶法。
3.血清HDL-C测定：超速离心结合ALBK法为HDL-C测定的参考方法。硫酸葡聚糖-镁沉淀法(DS法)结合ALBK法被美国胆固醇参考方法实验室网络(CRMLN)作为指定的比较方法(DCM法)。1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐的 磷钨酸镁沉淀法(PTA-Mg2 + 法)，但此法的主要缺点是标本需预先离心处理，结果易受高TG影响。
建议匀相测定法作为临床实验室测定血清HDL-C的常规方法。可供选择的方法主要有：清除法(Clearance method)，PEG修饰酶法(PEGME法)，包括反应促进剂-过氧化物酶清除法(SPD法)和过氧化氢酶清除法(CAT法)，选择性抑制法(PPD法)，免疫分离法(IS法)包括PEG/抗体包裹法(IRC法)和抗体免疫分离法(AB法)。
4.血清LDL-C测定：超速离心结合ALBK法为LDL-C测定的参考方法。
1995年中华医学会检验学会曾在国内推荐聚乙烯硫酸沉淀法(PVS法)作为LDL-C测定的常规方法，但此法的主要缺点是标本需预先离心处理，结果易受高TG影响。
建议匀相测定法作为临床实验室测定血清LDL-C的常规方法。可供选择的方法主要有：表面活性剂清除法(SUR法)，过氧化氢酶清除法(CAT法)，杯芳烃法(CAL法)，可溶性反应法(SOL法)和保护性试剂法(PRO法)。
5.血清apoAI和apoB测定：目前尚无公认的血清apoAI和apoB测定的参考方法。目前临床实验室测定血清apoAI、apoB含量的方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫浊度法[包括免疫散射比浊法(INA)和免疫透射比浊法(ITA)]。
建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清apoAI、apoB的常规方法，首选ITA法，其次为INA法。
6.血清Lp(a)测定：目前尚无公认的血清Lp(a)测定的参考方法。目前临床实验室测定血清Lp(a)的方法主要有ELISA和免疫浊度法，其中以ITA法最为常用。
建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清Lp(a)的常规方法。试剂所用抗体应为多克隆抗体或混合数株识别 apo(a)上不同抗原位点的单克隆抗体。首选ITA法，其次为INA法。
( 二)、测定所需仪器设备
性能符合要求或经检验合格的分光光度计、自动(全自动或半自动)生化分析仪均可用。所用加样器、稀释器和微量与常量吸管等均需校正合格。
建议用自动(全自动或半自动)生化分析仪进行临床血脂常规测定。
(三)、参数设置 应按照仪器和所用试剂盒的要求合理设置测定及校准参数。一般不宜随意更改参数。
(四)、质量控制 采用符合要求的质控血清进行室内质控。质控血清应至少包括有参考范围内水平和病理异常水平的两个值。有条件的实验室可购买商品化的血脂质控专用的质控血清。需要注意的是，选择质控血清时，应考虑血脂测定的项目和所用测定方法以及质控血清的适用范围。更换室内质控物时应提前做好准备，确保前后衔接。还应重视室间质评工作。
