红细胞检测和隐血试验在尿液检测中的影响因素
摘要 目的：对比四种不同方法检测尿液红细胞和血红蛋白的结果。以分析其影响因素和临床价值。方法：采用UF-100尿沉渣分析仪、尿沉渣检查尿红细胞、干化学法、胶体金单克隆抗体法隐血试验对167份尿液联合检查，对四种检测结果进行对比。结果：以镜检法为标准UF一100尿沉渣分析法红细胞准确度为86．2％，干化学法红细胞准确度为85．O％。尿隐血试验中，干化学敏感性为300 g／L，单克隆抗体隐血为200 g／L，干化学与胶体金单克隆抗体隐血指标(金标准)对比，干化学隐血法的敏感度为80．7％，特异性为84．3％。结论：四种检测方法的联合应用更能提高尿液检查的质量．对疾病的诊断、治疗及病程中动态观察有重要的参考价值。
尿液隐血和红细胞检测是诊断泌尿系疾病，特别是肾小球性与非肾小球血尿的重要指标之一。由于尿液成分的复杂性，会造成检验结果出现假阴或假阳结果，造成漏检或误诊 。为了解检测结果的可靠性、准确性和影响因素，我们用UF-100尿沉渣分析仪、尿沉渣显微镜检查尿红细胞、干化学法、单克隆抗体法隐血试验对167份尿液联合检查。
1 资料与方法
1．1 尿液标本的来源 所有尿液标本均来自病房患者晨尿，要求病房患者用专用尿杯留取中段尿，即时送检，以确保尿液新鲜。
1．2 与试剂 Clinitek 200尿干化学分析仪及尿十联试条(美国Bayer公司)；万华牌消康保便血胶体金检测试纸即OB试纸(美国万华普曼公司)：尿液干化学物(美国BIO-RAD公司)；UF-IO0全自动、原厂配套试剂、质控物及校准物
(日本Sysmex公司)；Olympus普通光学显微镜(日本Olympus公司)。
1. 3 试验方法 用一次性尿杯收集患者洁净中段晨尿，1 h内送检。于UF-100尿分析仪、尿干化学仪上检测及进行单克隆隐血试验，并对标本进行非染色尿沉渣镜检，2 h内完成。镜检操作如下：于刻度离心管加入混匀后新鲜尿液10 mL、1 500 r／min离心5 min，弃上层清液，留0．2 mL沉渣。轻摇使尿沉渣有形成分混匀后取0．02 mL于载玻片上镜检 。用不同质量浓度的人血红蛋白液分别为150、200、300、2 000 ug／L作干化学与胶体金单克隆抗体隐血试验进行灵敏度实验。
1．4 结果判断 UF-100尿分析仪及尿沉渣镜检结果均以红细胞>3／HP为阳性，尿干化学仪检测结果以“微量及以上”为阳性。单克隆抗体法尿隐血阳性以试带中出现两条明显红线为阳性判定标准。
1．5 统计学处理 用SPSS 11．0软件进行统计学处理，资料采用X 2检验，P<0．05为差异具有统计学意义。
2 结果
167例住院患者的尿液用四种方法同时检查．结果干化学法隐血试验阳性为60例．阳性率为35．9％；胶体金单克隆抗体隐血试验阳性为52例。阳性率为31．1％，沉渣镜检红细胞阳性为45例，阳性率为26．9％。UF-100尿分析仪检测红细胞阳性为48例，阳性率为28．7％。
以镜检法为标准，UF-100尿分析仪检测红细胞准确度为86．2％，干化学法检测红细胞准确度为85．0％(表1)。尿沉渣镜检与uF-100尿分析仪检测结果比较，X 2 =72．31，P<0．05；尿沉渣镜检与尿干化学仪检测结果比较，X 2 =75．05，P<0．05；尿沉渣镜检与单克隆抗体法检测结果比较，X 2=56．67，P <0．05。
尿隐血试验中，干化学法敏感性试验为300 ug／L，胶体金单克隆抗体隐血法为200 ug／L，尿干化学隐血指标与胶体金单克隆抗体隐血指标(金标准)同时检测，检测结果严格对比，干化学隐血法的灵敏度为80．7％，特异性84．3％(表2)。
3 讨论
尿液干化学分析仪检测隐血属于定性半定量方法，其原理是尿液中红细胞内的血红蛋白或其破坏释放的血红蛋白均含有亚铁血红素，具有过氧化物酶样活性，在氧化茴香素或过氧化氢烯枯存在条件下，催化邻甲联苯胺脱氢，出现颜色变化。胶体金
单克隆抗体隐血法原理是应用胶体金显色原理和层析技术，利用单克隆抗人血红蛋白抗体特异检测人血红蛋白。胶体金试纸可测出样本中的微量血红蛋白(200 g／L)，不与其他类血红蛋白结合，不受其他食物、药物及过氧化物影响，也不受铁剂干
扰，所以不会出现假阳性，只有当尿标本中含有人血红蛋白时，隐血试验才呈阳性，故具有较高的灵敏度和准确度，且特异性强，并能检测已破碎的红细胞，大大提高了隐血检测的阳性率。167份尿液检查中干化学法隐血反应阳性率为35．9％，胶体金单克隆抗体隐血阳性率为31．1％，由以上实验看出干化学法检测隐血阳性率高于单克隆抗体法，但干化学法检测敏感度比单克隆抗体法低，干化学与胶体金单克隆抗体隐血指标(金标准)对比，干化学法检测隐血阳性6O例中有18例存在假阳性。其假阳性原因有：(1)游离血红蛋白、肌红蛋白具有过氧化物酶活性物质。(2)尿道感染，一些的过氧化物，如真菌。(3)化学污染，如次氯酸盐等。(4)部分患者尿中含不稳定酶，可使试剂块颜色改变。(5)试条过期、污染、保存不当、操作不正确等 。假阴性原因有：尿中含大量维生素C、尿液浓缩、尿蛋白含量高等。目前由于常用的尿干化学检测隐血的方法存在假阳性与假阴性的问题，对尿液中无完整的红细胞，而存在游离血红蛋白的尿样本，采用单克隆抗体法检测尿隐血，能弥补尿干化学检测隐血的方法的不足。故在实际工作中，尤其是对尿隐血为弱阳性标本，应通过单克隆隐血法测定尿隐血来进一步确定检验结果，以免出现不必要的漏诊和误诊。
UF-100尿沉渣分析仪显著提高了红细胞计数的准确度与精密度。然而它在临床应用过程中出现了一个严重的缺陷：干扰因素太多、敏感性高、特异性差。其假阳性原因有：当尿液中出现结晶、精子、细菌、真菌或其他粒子时都会干扰它的检测和对红细胞的识别。因为UF-100分析仪是根据细胞的前向散射光强度和荧光强度来分析的，而结晶、精子、细菌和真菌的大小与红细胞相近，特别是平均荧光强度值较高时，红细胞假阳性的可能性大，如果同时红细胞荧光脉冲分布宽度也较大时．可基本确信红细胞假阳性。UF-100分析仪红细胞计数结果阳性有48例，显微镜检测阴性结果中，假阳性13例．其中结晶6例，精子1例，真菌4例，细菌2例，假阳性率占27．1％。而尿液中的红细胞溶解，却又会造成假阴性，UF-100就无法计数，只有通过胶体金单克隆抗体法隐血试验才能检出。通过对20例干化学阳性而UF-100计数结果阴性的标本显微镜检查，镜下全部未见有红细胞，再通过胶体金单克隆抗体法做隐血试验，结果18例阳性，2例阴性，假阴性率高达90％ 这些标本如果没有经过显微镜检查或胶体金单克隆抗体法隐血试验验证，就会向临床医生提供错误信息。
目前没有一种尿检方法是完美无缺的。由于四种方法检测原理、影响因素不同，检测结果存在一定差异。UF-100全自动尿沉渣分析仪和镜检只能对尿中完整细胞有形成分进行检测，对破损的细胞不能检测、而干化学和胶体金单克隆抗体隐血法却
能检测到溶解的红细胞，不会对溶解的红细胞漏检，但干化学法检测隐血假阳性多，这是尿液分析仪与镜检法符合率相差较大的主要原因。由于尿干化学分析仪测定结果假阳性较多，必须经过显微镜检查或胶体金单克隆抗体法试验验证，以保证报告
的可靠性，四种检测方法的联合应用可以取长补短，更能提高尿液检查的质量和保证报告的可靠性，对疾病的诊断、治疗及病程中动态观察有重要的参考价值。
