乙酰胆碱酯酶的测定实验
实验方法原理
乙酰胆碱水解酶(AChE)
乙酰胆碱+H2O → 胆碱+乙酸
实验材料 乙酰胆碱酯酶
试剂、试剂盒 磷酸钾氯化乙酰胆碱白明胶氢氧化钠
实验步骤
空白对照:保持 pH 7.4,持续记录几分钟每次 0.01 mol/L 氢氧化钠的用量。
样品:加入酶溶液(例如 0.1~1 ml),保持 pH 7.0,并记录 5 min 每次 0.01 mol/L 氢氧化钠的用量。
计算 25℃ pH 7.4 时,每分钟一个单位水解的 1 umol 乙酰胆碱。
注意事项
其他
试剂:
0.02 mol/L 磷酸钾,pH 7.0
0.005 mol/L 氯化乙酰胆碱(Mr=181.7;91 mg 溶于 100 ml 水中)
0.01% 白明胶,包括 0.2 mol/L 氯化钠和 0.04 mol/L 氯化钠(0.1 g 白明胶,11.7 g NaCl,8.1 g MgCl2· 6 H2O 溶于 1 L H2O)
0.01 mol/L 氢氧化钠标准溶液作为滴定剂,加入自动滴定器的滴管中
乙酰胆喊酯酶,用 0.02 mol/L 磷酸钾 pH 7.0 稀释到约 20 U/ml
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