HIV测定（ELISA法）标准操作规程
1、检验目的
应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。
2、原理
采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV（1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。
3、性能参数
灵敏度高（0.5ng/ml）
4、标本要求
（1）标本类型：血清，血浆。
（2）标本采集：见标本采集手册
（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融
（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
5、容器和添加剂类型
6、试剂
（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。
（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司
（3）包装规格： 96T/Kit
（4）试剂盒组成：①、HIV酶标板；②、HIV酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。
7、仪器设备：
酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。
洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。
移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。
8、校准程序
9、操作步骤
①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。
②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。
③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。
④、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。
⑤、加酶：每孔加酶结合物100μl（空白对照孔除外），充分混匀，用封板膜封板后置37℃温育30min。
⑥、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。
⑦、显色：每孔加入底物缓冲液50μl，TMB 50μl，轻轻振荡混匀，封板后置37℃避光显色10min。
⑧、测定：每孔加终止液50μl，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630 nm），空白调零，读取各孔OD值。
⑨、判断结果：计算临界值（cut-off）值。
临界值=阳性对照值×10%。（若阳性对照OD值＞2.5按2.5计算）
正常情况下，阴性对照孔的OD值≤0.08。样品OD值＜临界值者为HIV抗体阴性。若1孔阴性对照的OD值＞0.08应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值＞0.08，应重复实验。
正常情况下，阳性对照孔的OD值≥0.80。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。若1孔阳性对照的OD值＜0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值＜0.8，应重复实验。
注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照《全国HIV检测管理规范》送HIV确证实验室进行确证试验。
10、质量控制：
每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔OD值采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11、干扰和交叉反应
12、生物参考区间 正常人阴性。
13、患者检验结果的可报告区间 阳性表示HIV病毒感染。
14、临床意义 用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。
15、其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格"防伪标签的试剂。
