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白细胞的纯化操作方法

2019.5.21

1.低渗处理法

        【试剂及配制】

        (1)蒸馏水

        (2)1.8%氯化钠溶液

        【操作方法】

        (1)上述各种方法所得白细胞悬液中加入1ml蒸馏水,轻轻地震荡20s,使混杂的红细胞裂解;

        (2)加等量1.8%氯化钠溶液,调至等渗;

        (3)再加Hank’s溶液混匀,离心沉淀,反复两次;

        (4)取末次沉降细胞配成所需浓度的白细胞悬液。

         2.氯化铵处理法

        【试剂及配制】

        (1)Gey溶液母液A: 称取35.0g NaCl, 1.85g KCl, 1.5g Na2HPO4.H2O,0.119g KH2PO4,5.0g 葡萄糖,和50mg 酚红,并将上列各物溶于1000ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。如果用NH4Cl 35.0g代替NaCl,补优质明胶5g,即为溶血用的Gey溶液的母液A。

        (2)Gey溶液母液B:称取0.42g MgCI2.6H2O,0.14g MgSO4.7H2O,O.34g CaCl2,并将上列各物溶于100ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。

        (3)NaHCO3溶液:称取2.25g NaHCO3,溶于100ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。

        (4)Gey应用液:取母液A 20ml,蒸馏水70ml及母液B 5ml,混合后加NaHCO3溶液5ml即成。

        【操作方法】

        (1)在白细胞悬液中加入含氯化铵的Gey应用液1ml,轻摇2min,使红细胞裂解;

        (2)加入等量的不含氯化铵的Gey应用液,离心,取沉淀细胞配成白细胞悬液。

        【注意事项】

        用上述诸法所得细胞悬液,含有较多粒细胞、单核细胞和血小板,而淋巴细胞纯度约为60~67%。


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